Eca-109食管癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)Eca-109食管癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
1-(2-Methylphenyl)piperazine 1-鄰甲基苯基哌嗪二鹽酸鹽 55974-34-0
1-(2-Methylpyridin-3-yl)ethanone 3-乙酰基-2-甲基吡啶 1721-12-6
英文名稱 中文名稱 CAS號
Reticuline 牛心果鹼 485-19-8
(S)-1,2,3,4-Tetrahydro-1-naphthylaMine (S)-2-四氫萘胺 21880-87-5
(S)-1,2,3,4-Tetrahydro-5-Methoxy-N-propyl-2-naphthalenaMine hydrochloride (S)-5-甲氧基-1,2,3,4-四氫-N-丙基-2-萘胺 (羅替戈汀) 101403-24-1
(S)-1,2,3,4-Tetrahydro-5-Methoxy-N-propyl-2-naphthalenaMine hydrochloride (S)-1,2,3,4-四氫-5-甲氧基-N-丙基-2-萘胺鹽酸鹽 93601-86-6
(S)-1,2-Epoxy-5-hexene 137688-21-2
Oxirane, 2-propyl-,(2S)- 123731-68-0
(S)-1.2-DiaMinopropane Dihydrochloride (S)-(-)-二氨基丙烷二鹽酸鹽 19777-66-3
(S)-1-BENZYL-5-OXO-PYRROLIDINE-3-CARBOXYLIC ACID METHYL ESTER (S)-1-芐基-5-氧代吡咯烷-3-甲酸甲酯 428518-44-9
(S)-1-Boc-piperazine-2-carboxylic acid (S)-1-Boc-哌嗪-2-羧酸 159532-59-9
(S)-1-Boc-pyrrolidine-3-carboxylic acid Methyl ester (S)-1-Boc-3-羧基吡咯烷甲酯 313706-15-9
(S)-1-CyclopropylethylaMine (S)-1-環丙基乙胺,CHIPRO 195604-39-8
(S)-1-N-Boc-piperazine-2-carboxylic acid Methyl ester (S)-1-BOC-2-哌嗪甲酸甲酯 796096-64-5
(S)-2′-Methoxy-[1,1′]binaphthalenyl-2-ol (S)-2'-甲氧基-[1,1']聯萘-2-醇 35193-69-2
(S)-2-(2-NAPHTHYL)GLYCOLIC 144371-23-3
(S)-2-(3-((2-Isopropylthiazol-4-yl)Methyl)-3-Methylureido)-3-Methylbutanoic acid N-[N-甲基-N-[(2-異丙基-4-噻唑基)甲基]氨基羰基]-L-* 154212-61-0
(S)-2-(AMINOETHYL)-1-N-BOC-PYRROLIDINE (S)-2-(氨乙基)-1-N-BOC-吡咯烷 239483-09-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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