SMMC-7721肝癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SMMC-7721肝癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
-CHLOROMETHYL-2,2,3,3-TETRAFLUOROCYCLOBUTANE 1-氯甲基-2,2,3,3-四氟環丁烷 356-80-9
1-ChloroMethyl-4-fluoro-1,4-diazoniabicyclo[2.2.2]octane bis(tetrafluoroborate) 1-氯甲基-4-氟-1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷二(四氟硼酸)鹽 140681-55-6
1-CHLORO-N,N-DIMETHYL-2-PROPYLAMINE 2-二甲氨基氯丙烷 53309-35-6
1-cya-cyclopentene 氰基-1-環戊烯,97% 3047-38-9
1-CYANODECANE N-十一烷基腈 2244/7/7
1-Cyclohexene-1-carboxylic acid 環己烯甲酸 636-82-8
1-Isocyanocyclohexene 異氰基環己烯 1121-57-9
1-Cyclopentene-1,2-dicarboxylic anhydride 1-環戊烯-1,2-二羧酸酐 3205-94-5
1-Cyclopentene-1-carboxylicacid,5-oxo-,Methylester(9CI) 36601-73-7
1-CYCLOPENTYL-1-PHENYLMETHANAMINE 苯基環戊基甲胺 23459-36-1
1-Deoxy-1-[(3,4-diMethylphenyl)aMino]-D-ribitol 1-(D-核糖氨基)-3,4-二甲基苯 3051-94-3
1-diethoxyphosphorylsulfanyl-4-nitro-benzene 3270-86-8
1-DIMETHYLAMINO-2-METHYL-2-AMINOPROPANE 1-二甲基氨基-2-甲基-2-氨基丙烷 89379-40-8
1-Dodecanethiol 十二硫醇 112-55-0
1-DodecylaMine hydrochloride 癸胺鹽酸鹽 929-73-7
1-epi-Calcitriol 66791-71-7
1-Ethoxycarbonylbicyclo[2.2.2]octane-4-carboxylic acid 834-50-4
1-Ethyl-3,5-difluorobenzene 3,5-二氟乙苯 117358-52-8
1-ethylvinyl acetate 10500-08-0
1fcl 14737-08-7
1-FLUORO-3-(2-NITRO-IMIDAZOL-1-YL)-PROPAN-2-OL 氟甲氧甲基硝基咪唑乙醇 13551-89-8
1-FLUORO-5-HEXENE 373-15-9
BIS(2-CHLOROISOPROPYL)ETHER 二氯異108-60-1
1g 4-甲基-2-氨基噻吩鹽酸鹽 14770-82-2
1g 水合氧化鐵(III) 20344-49-4
1g 203866-21-1
1g 4-(氮雜環丁烷-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯 219725-67-4
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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