AsPC-1轉移胰腺腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)AsPC-1轉移胰腺腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
1H-Pyrrole-1-pentanoicacid, 2,5-dihydro-2,5-dioxo-, 2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester 103750-03-4
1H-Pyrrole-2,5-dione,1,1 118377-62-1
1H-Pyrrole-2,5-dione,3-(1-Methyl-1H-indol-3-yl)-4-[1-[1-(2-pyridinylMethyl)-4-piperidinyl]-1H-indol-3-yl]-,hydrochloride (1:1) 359017-79-1
1-Methyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid 1-甲基-1H-吡咯-3-羧酸 36929-61-0
H-Pyrrolo[2,3-b]pyridin-5-ol, 4-fluoro- (9CI) 651744-21-7
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-2,3-DIONE 1H-吡咯[2,3-B]吡啶-2,3-二酮 5654-95-5
1H-Pyrrolo[2,3-b]pyridine-3-propanoic acid 1H-吡咯并[2,3-B]吡啶-3-丙酸 27663-72-5
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-4-CARBOXYLIC ACID 7-氮雜吲哚-4-羧酸 479553-01-0
1H-PYRROLO[2,3-B]PYRIDINE-6-CARBOXYLIC ACID 7-氮雜吲哚-6-羧酸 898746-35-5
1H-Pyrrolo[2,3-c]pyridine,2,3-dihydro-(9CI) 2,3-二氫-1H-吡咯并[2,3-C]吡啶 760919-39-9
Ethyl 4-chloro-7h-pyrrolo[2,3-d]pyriMidine-6-carboxylate 4-氯-7H-吡咯并[2,3-D]嘧啶-6-甲酸乙酯 187725-00-4
4-Azaindole-3-carboxylic acid 1H-吡咯并[3,2-B]吡啶-3-羧酸 860496-20-4
1H-Pyrrolo[3,2-B]pyridine-6-boronic acid pinacol ester 1045855-91-1
1-Hydroxy-1-phenylacetone 1-羥基-1-苯丙酮 90-63-1
1-HYDROXY-2-BUTANONE 1-羥基-2-丁酮 5077-67-8
1-Hydroxy-3-cyclohexene 1-羥基-3-環己烯 822-66-2
1-hydroxyisoquinoline 1-羥基異喹啉 491-30-5
1-Hydroxypyridine-2(1H)-Thione 吡啶硫酮 1121-30-8
1-IODO-1H,1H,2H,2H-PERFLUOROTETRADECANE 30046-31-2
1-Isopropenyl-4-Methoxybenzene 1-異丙烯基-4-甲氧基苯 1712-69-2
SulbutiaMine 舒布硫胺 3286-46-2
1Kg and 5Kg 4167/2/6
1-Methoxy-2-propyl acetate 丙二醇甲醚醋酸酯 108-65-6
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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