SK-N-MC神經上皮瘤細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SK-N-MC神經上皮瘤細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2-(3,4-diMethoxyphenyl)ethylaMine 3,4-二甲氧基* 120-20-7
2-(3,4-EPOXYCYCLOHEXYL) ETHYLMETHYL DIMETHOXYSILANE 97802-57-8
TafaMidis 2-(3,5-二)-6-苯并惡唑甲酸 594839-88-0
SodiuM 2808-33-5
2-(3-AMinopropyl)aniline 39909-27-8
2-(3-BroMo-2-oxopropyl)-3-Methoxy-1-piperidinecarboxylic acid 2-propenyl ester 2-(3-溴-2-羰基丙基)-3-甲氧基-1-哌啶酸 2-丙烯醇酯 64544-00-9
O-succinylbenzoate 27415-09-4
2-(3-ISOBUTYLPHENYL)PROPANOIC ACID *雜質A 66622-47-7
2-(3-METHYLBUTYRYL)-5,5- DIMETHYL-1,3-CYCLOHEXANDIONE DMAB-OH 172611-72-2
2-(4-(1H-pyrrol-1-yl)phenyl)acetic acid 22048-71-1
2-(4'-(DIMETHYLAMINO)PHENYL)-6-METHYL-BENZOTHIAZOLE 2-(4'-(二甲胺基)苯基)-6-甲基苯并噻唑 10205-62-6
2-(4,4-Diethoxybutyl)-1H-isoindole-1,3 (2H)-dione 32464-55-4
2-(4-AMinophenyl)ethylaMine HCl Salt 4-氨基*雙鹽酸鹽 13078-82-5
2-(4-Benzoyl-3-hydroxyphenoxy)ethyl acrylate 2-丙烯酸 2-(4-苯甲酰-3-羥基苯氧基)乙基酯 16432-81-8
2-(4-BROMOMETHYLPHENYL)PYRIDINE 2-(4-溴甲基苯基)吡啶 257907-04-3
4-CyanophenylethylaMine 對氰基* 132224-93-2
2-(4-FLUOROPHENYL)-2-PHENYLACETIC ACID 723-69-3
2-(4-METHYLPIPERAZIN-1-YL)-5-NITROANILINE 2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯胺 5367-66-8
2-(4-NITROPHENYL)ETHENYLBORONIC ACID 216019-32-8
gaMMa-crotonolactone 2(5H)-呋喃酮 497-23-4
HATU HATU2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 148893-10-1
2-(7-oxabicyclo[4.1.0]hept-3-yl)spiro[1,3-dioxane-5,3'-[7]oxabicyclo[4.1.0]heptane] 2-[7-氧雜雙環[4.1.0]庚-3-基]螺[1,3-二氧雜環己烷-5,3'-(7)氧雜雙環[4.1.0.]庚烷] 3388/3/2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養基+10%DMSO(現用現配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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