SW-13腎上腺皮質腺癌細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)SW-13腎上腺皮質腺癌細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產品:
2,6-DiMethylbenzothiazole 2,6-二甲基苯并噻唑 2941-71-1
2,6-DiMethylbenzylaMine 2,6-二甲基芐胺 74788-82-2
2,6-DIMETHYLHEPTANOIC ACID METHYL ESTER 33315-72-9
2,6-ditert-butyl-4-(dioctadecoxyphosphorylMethyl)phenol 3135-18-0
2,6-ditert-butyl-4-[2-(3,5-ditert-butyl-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)ethylidene]cyclohexa-2,5-dien-1-one 3,3',5,5'-四叔丁基-4,4'-氐醌 809-73-4
2,6-ditert-butylnaphthalene-1-sulfonic acid 14992-58-6
2,6-lutidine 2,6-二甲基吡啶 108-48-5
2,6-Naphthalenecarbodithioic acid 92827-62-8
2,6-Pyridinecarboxylic acid MonoMethyl ester 2,6-吡啶二羧酸單甲酯 7170-36-7
2,6-PyridinediMethanol 2,6-吡啶二甲醇 1195-59-1
2,7-DIAZASPIRO[4.4]NONANE, 2-METHYL 2-甲基-2,7-二氮雜螺[4.4]壬烷 135380-53-9
9,9-bis-(6-BroMohexyl)-2,7-dibroMofluorene 570414-33-4
2,7-DibroMo-9,9'-spiro-bifluorene 2,7-二溴-9,9'-螺二芴 171408-84-7
ADIPIC ANHYDRIDE 己二酸酐 2035-75-8
6-aMiH-purine-2,8(3H,7H)-dione 2,8-二羥基腺嘌呤 30377-37-8
2,9-dibroMo-1,1phenanthroline 2,9-二溴-1,10-菲羅啉 39069-02-8
2,9-dichloro-1,10-phenanthroline 2,9-二氯-1,10-菲羅啉 29176-55-4
2,9-Oxonanedione 10521-06-9
β-NicotinaMide adenine dinucleotide 2′:3′-cyclic Monophosphate disodiuM salt hydrate 100929-77-9
Donepezil 1-芐基-4-[(5,6-二甲氧基茚滿酮-2-基)甲基]哌啶 120014-06-4
2-[(1E,3Z)-3-CHLORO-5-(1,3,3-TRIMETHYL-1,3-DIHYDRO-2H-INDOL-2-YLIDENE)-1,3-PENTADIENYL]-1,3,3-TRIMETHYL-3H-INDOLIUM PERCHLORATE 2-[(1E,3Z)-3-氯-5-(1,3,3-*基-1,3-二氫-2H-吲哚-2-亞基)-1,3-戊二烯基]-1,3,3-*基-3H-吲哚高氯酸鹽 112324-77-3
2-[(1-oxohexadecyl)oxy]ethyl stearate 26158-81-6
BMS 299897 2-[(1R)-1-[[()磺酰基](2,5-二氟苯基)氨基]乙基]-5-氟苯丁酸 290315-45-6
2-[(1S,2S)-1-Ethyl-2-(phenylMethoxy)propyl]hydrazinecarboxaldehyde 2-[(1S,2S)-1-乙基-2-芐氧基丙基]肼甲醛 170985-85-0
2-[(2-Chlorophenyl)aMino]-benzaldehyde 71758-44-6
2-[(5-BroMo-2-pyridylazo]-5-[N-propyl-N-(3-sulfopropyl)aMino]phenol,disodiuMsalt,dihydrate 81608-06-2
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內.
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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