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HL80061.2.2 v.A

特殊石蠟切片中性脂質油紅O直接染色試劑盒產品說明書

主要用途

特殊石蠟切片中性脂質油紅O直接染色試劑是一種旨在使用特殊脫蠟處理和高度脂溶性偶氮染料油性紅O染色技術，分析石蠟包埋組織切片中（大程度保留的）中性甘油三脂、脂質以及脂蛋白等脂質狀況的而經典的技術方法。該技術經過精心改良傳統方法、成功實驗證明的。主要適用于各種人體和動物組織石蠟切片的脂質檢測。用于成脂細胞定性、細胞病理學分析（脂質細胞瘤；LIPOID）和識別（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。產品即到即用，操作簡捷，性能穩定，著色清晰。

技術背景

脂類物質（LIPIDS）是一類脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇類（STEROL）物質，例如膽固醇。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用，是膜結構的組成成分和細胞信號分子。油性紅O（Oil Red O），又稱為27號紅色溶劑（Solvent Red 27）或蘇丹紅5B（Sudan Red 5B），是一種脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME AZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。染色顯示脂類物質呈紅色。由于石蠟包埋的組織切片在去石蠟的過程中，有機溶劑諸如二甲苯等容易破壞和減少組織中的脂質成分，因此使用非二甲苯類脫蠟，以大程度保護組織中的脂質成分是油性紅O染色的關鍵。

產品內容

脫蠟液（Reagent A）          50毫升

凈化液（Reagent B）   10毫升

清理液（Reagent C）   50毫升

脫水液（Reagent D）   20毫升

染色液（Reagent E）   10毫升

澄清液（Reagent F）   10毫升

產品說明書    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

用戶自備

蘇木素復染試劑盒（80067）：用于常規染色后復染

經典水相封片液（12146）：用于染色后封片處理

烘箱：用于石蠟切片處理

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

• 脫蠟處理

• 取出待測的6微米厚的石蠟包埋的組織切片
• 放進80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 小心加上500微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 重復實驗步驟4至6一次
• 小心加上200微升凈化液（Reagent B）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的凈化液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent C）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent C）

• 樣本染色處理

• 小心加上200微升脫水液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
• 室溫下靜置5分鐘
• 小心抽去脫水液（Reagent D）
• 重復實驗步驟1至3一次
• 小心加上200微升染色液（Reagent E），覆蓋整個生長表面
• 室溫下靜置7分鐘；或直至可見紅色
• 小心抽去染色液（Reagent E）
• 室溫下，小心加上200微升清理液（Reagent C）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent C）

三、樣本復染處理

• 小心加上200微升澄清液（Reagent F），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去澄清液（Reagent F）
• 小心加入200微升清理液（Reagent C）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent C）
• 樣本復染處理（蘇木素）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：脂類物質呈現紅色（如果復染則細胞核呈現藍色）

注意事項

• 本產品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 建議用戶避免使用常規石蠟包埋組織切片，即石蠟包埋前避免二甲苯等透明處理
• 染色時更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態下進行
• 樣品染色避免過度，肉眼可見紅色即可終止染色
• 建議使用蘇木素復染試劑盒（80067），增加染色對比度
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 封片處理，避免使用有機溶劑類包括乙醇等，而使用水相封片液；建議使用經典水相封片液（12146）
• 本公司提供系列脂類染色試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定顯色清晰