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抗原修復(fù)存在的問題和克服的方法2011/01/15
高溫抗原修復(fù)因其機(jī)理相當(dāng)復(fù)雜,對(duì)某些存在的問題不可能用設(shè)計(jì)對(duì)照的方法加以解決。有些抗體在冰凍切片上呈陰性反應(yīng),但石蠟切片用抗原修復(fù)后卻能很好地顯示。對(duì)某些應(yīng)表達(dá)在胞漿或膜上的抗原,經(jīng)過修復(fù)后,絕大部分表達(dá)在核內(nèi),例如p185、Bcl—2、P-gp和nm23;而有些表達(dá)在核內(nèi)的抗原經(jīng)過修復(fù)會(huì)出現(xiàn)在胞漿內(nèi),例如p53、PCNA、ki-67和細(xì)胞周期素等。因此在使用該方法時(shí)一定小心,對(duì)結(jié)果的判斷也要客觀地作出分析。某些商品化抗體因自身抗體質(zhì)量的問題,在石蠟切片上無論用什么方法,抗原怎么修復(fù)都無法顯示陽(yáng)
抗原的暴露主要采用酶消化或用表面活性劑方法2011/01/15
抗原的暴露主要采用酶消化或用表面活性劑的方法,酶的種類很多,其*pH值、離子濃度等對(duì)抗原的暴露均可產(chǎn)生不同的影響。另外,何種抗原的檢測(cè)需何種酶也有一定特異性。目前zui常用的酶有*、蛋白酶K、*、*、無花果蛋白酶、*及尿素酶等,另外還有西瓜蛋白酶、蘋果蛋白酶和香蕉蛋白酶。其中*、蛋白酶K和無花果蛋白酶消化zui強(qiáng)烈,其次是*、*及*。各種消化酶的具體配制和使用情況如下。(一)消化酶的配制1.**較常用,也較易控制,主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的檢測(cè)。使用的工作濃度一般為0.05%,-0.1%。配制方法:稱
倉(cāng)鼠* (Glu)Elisa試劑盒說明2011/01/13
試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。倉(cāng)鼠*(Glu)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)使用說明書【倉(cāng)鼠*(Glu)Elisa試劑盒試劑盒名稱】倉(cāng)鼠*(Glu)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)【倉(cāng)鼠*(Glu)Elisa試劑盒試劑盒用途】定量檢測(cè)倉(cāng)鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中*(Glu)的含量。【倉(cāng)鼠*(Glu)Elisa試劑盒檢測(cè)原理】本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被倉(cāng)鼠*(Glu)多克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成
6se48系列西門子變頻器的結(jié)構(gòu)2011/01/13
6se48系列西門子變頻器同其它通用變頻器一樣,是交-直-交電壓源型spwm(正弦脈沖寬度調(diào)節(jié)器)變頻器,它的主電路主要用不可控整流器、spwm逆變器,其輸出電壓波形接近正弦波。西門子變頻器的組成結(jié)構(gòu)主要由主電路、控制電路、保護(hù)電路及顯示接口裝置等構(gòu)成。按元件組成來分,又可分為主控制板、sm板、門控制板和接口單元。首先是它的主控制板sr6050,它包含一個(gè)16字節(jié)處理系統(tǒng),這個(gè)微機(jī)系統(tǒng)控制和監(jiān)測(cè)內(nèi)部的變頻器運(yùn)行,并處理所有的外部運(yùn)行。其次是sm板,又叫電源和信號(hào)探測(cè)板,是集直流電源和信號(hào)檢測(cè)功能
瓦楞紙箱抗壓強(qiáng)度之紙張對(duì)其的影響2011/01/13
點(diǎn)擊次數(shù):47發(fā)布時(shí)間:2011-1-1016:58:44在大多的抗壓計(jì)算公式中,多是利用原紙環(huán)壓強(qiáng)度來進(jìn)行計(jì)算,而事實(shí)上影響紙箱抗壓的不單單是原紙的環(huán)壓強(qiáng)度,影響瓦楞紙箱抗壓強(qiáng)度之紙張對(duì)其的影響,應(yīng)該包括紙張的環(huán)壓強(qiáng)度,抗張強(qiáng)度,緊密度,以及紙張的防水性和吸水性等等。原紙測(cè)試環(huán)壓測(cè)試,瓦楞原紙的環(huán)壓測(cè)試分縱向的環(huán)壓強(qiáng)度和橫向的環(huán)壓強(qiáng)度,在環(huán)壓測(cè)試取樣測(cè)試時(shí)需要注意一點(diǎn),縱向的環(huán)壓強(qiáng)度取樣時(shí)需要與紙幅幅寬方向一致,橫向的環(huán)壓強(qiáng)度取樣時(shí)需要與紙幅長(zhǎng)度方向一致,在測(cè)試過程中我們會(huì)發(fā)現(xiàn),盡管長(zhǎng)網(wǎng)紙機(jī)的
裂解位點(diǎn)的組成對(duì)禽流感病毒毒力的影響2011/01/04
zui初的HA位于感染的宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜上,通過C末端的跨膜區(qū)固定在細(xì)胞膜上。這種狀態(tài)的HA稱為HA0,它還沒有進(jìn)行zui后的修飾,因而沒有*的生物學(xué)活性。zui后的修飾主要是在宿主蛋白酶(如furin和PC6*蛋白酶)的作用下,在HA0特定區(qū)域發(fā)生裂解,產(chǎn)生兩個(gè)亞單位HAl和HA2,它們通過一個(gè)二硫鍵連接。當(dāng)HA經(jīng)過修飾,并裝配進(jìn)新的病毒粒子后,它就能使病毒粒子吸附到宿主細(xì)胞的表面,促進(jìn)進(jìn)入和融合。病毒粒子進(jìn)入宿主細(xì)胞后就進(jìn)入溶酶體。在溶酶體中,經(jīng)細(xì)胞質(zhì)子泵使之酸化,在pH5.o~6.o的環(huán)境
PBl編碼的流感病毒第11種蛋白質(zhì)(PBl-F2)可能對(duì)毒力起重要作用2011/01/04
2001年Chen等報(bào)道發(fā)現(xiàn)了流感病毒由PBl十1閱讀框編碼的第u種功能蛋白--87殘基蛋白PBl-F2。PBl-F2與其他流感基因產(chǎn)物相比,除了在產(chǎn)生時(shí)其翻譯模式都是正常閱讀框改變以外,還有如下一些特性:①不在某些動(dòng)物(尤其豬)流感病毒分離株中存在;②在不同的感染細(xì)胞中表達(dá)不一樣;③快速的蛋白酶依賴性降解;④分布在細(xì)胞的線粒體中。PBl-F2能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,人工突變干擾PBl-F2的表達(dá),人單核細(xì)胞凋亡的程度要比暴露于PBl-F2的情況下低得多,推測(cè)是由于PBl-F2損害細(xì)胞內(nèi)部的能量工廠--
瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)診斷禽流感2011/01/04
AGP是在瓊脂凝膠中進(jìn)行的抗原-抗體免疫沉淀反應(yīng),主要用于病毒抗原型特異性鑒定,即用已知陽(yáng)性血清和未知抗原進(jìn)行AGP試驗(yàn)。AGP是用來檢測(cè)A屬(型)流感病毒特異性血清抗體,即抗RNA-核蛋白(即RNP)和基質(zhì)蛋白(M1)抗體,因而適用于鑒定流感病毒。1970年Beard將AGP用于禽流感Ab的檢測(cè)。該法優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便快捷,特異性強(qiáng),不受病毒亞型限制,缺點(diǎn)是靈敏性較低。目前AGP法中zui常用的是免疫雙擴(kuò)散,與普通AGP法相比,不僅提高了其敏感度,且快速省時(shí),以此法為獲得了良好的結(jié)果。Ag制備:感染雞
新城疫毒株分類2011/01/04
從不同地區(qū)和雞群分離到的NDV對(duì)雞的致病性有明顯差異。根據(jù)不同毒力毒株感染雞表現(xiàn)的不同,可將NDV分為幾種致病型:①速發(fā)型或強(qiáng)毒型毒株,在各種年齡易感雞引起急性致死性感染;②中發(fā)型或中毒型毒株,僅在易感的幼齡雞造成致死性感染;③緩發(fā)型(即低毒型)或無毒型毒株,表現(xiàn)為輕微的呼吸道感染或無臨診癥狀腸道感染。NDV的毒力分型必須進(jìn)行生物學(xué)試驗(yàn),即依據(jù)雞胚平均死亡時(shí)間(MBT),1日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(1CPl)和6周齡雞靜脈接種致病指數(shù)(1VPl)來區(qū)別。近年來,研究者在用試管內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行NDV的毒
基因常見問題解答2010/12/13
長(zhǎng)片段重復(fù)。大量的長(zhǎng)片段重復(fù)很可能會(huì)延長(zhǎng)基因合成的時(shí)間,甚至導(dǎo)致基因*無法合成。高GC%。基因內(nèi)部的局部高GC%會(huì)嚴(yán)重影響PCR擴(kuò)增和測(cè)序。二級(jí)結(jié)構(gòu)。堿基序列的反轉(zhuǎn)、重疊等會(huì)嚴(yán)重影響PCR擴(kuò)增,在測(cè)序時(shí)也可能會(huì)因此而測(cè)不通或信號(hào)突然中斷等。測(cè)序引物與基因內(nèi)部的特殊序列結(jié)合導(dǎo)致無法正常測(cè)序,必須重新設(shè)計(jì)測(cè)序引物。對(duì)策:對(duì)密碼子進(jìn)行優(yōu)化,盡量減少基因序列中的重復(fù)序列,高GC%區(qū)和二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)。2.PCR出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶引物與靶序列不*互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及
熱穩(wěn)定腸毒素(ST)的快速檢測(cè)與鑒定2010/12/03
天然的ST為小分子質(zhì)量多肽,無免疫原性,以往只能用乳鼠胃內(nèi)投服試驗(yàn)檢測(cè)之。近些年來,用偶聯(lián)法使ST獲免疫原性而成功地研制出相應(yīng)抗體,一系列快速檢測(cè)ST·的免疫學(xué)方法也隨之形成。現(xiàn)將部分方法簡(jiǎn)介如下。(1)ELISA檢測(cè)STDe.Mai等(1983)以過氧化物酶標(biāo)記抗體,用抗原競(jìng)爭(zhēng)間接法檢測(cè)培養(yǎng)液中STl。定性檢測(cè)時(shí)底物用5—氨基水楊酸,定量時(shí)用鄰苯二胺。此法與乳鼠試驗(yàn)的相符率為96.7%,無假陽(yáng)性。‘Thompson等(1984)建立了一種快速ELISA,經(jīng)提高酶標(biāo)記抗體濃度和競(jìng)爭(zhēng)作用溫度以及減
基于特異性抗體的沙門菌病免疫學(xué)檢測(cè)方法2010/12/03
隨著抗體制備技術(shù)的不斷進(jìn)步,特別淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的出現(xiàn),使得研究人員能夠制備出高品質(zhì)的抗沙門菌菌體或鞭毛抗原的屬特異性抗體,用以建立一些快速的檢測(cè)方法。已建立的沙門菌免疫學(xué)檢測(cè)方法有許多種,大致可分為以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、放射免疫試驗(yàn)為基礎(chǔ)的方法及其他多種以抗體為基礎(chǔ),利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴(kuò)散及免疫色譜技術(shù)的方法。(1)免疫酶技術(shù)在實(shí)踐中,ELISA作為一種沙門菌檢測(cè)的高敏感性檢測(cè)技術(shù),由于其安全性、簡(jiǎn)便性等方面的優(yōu)點(diǎn),使其在臨床檢驗(yàn)以及科研中被廣泛應(yīng)用。文其乙等應(yīng)用王志
結(jié)核病的酶學(xué)診斷與色譜技術(shù)診斷2010/12/03
酶學(xué)診斷1970年國(guó)外開始研究酶學(xué)檢測(cè)在結(jié)核病診斷和鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值,我國(guó)從1980年才開始這方面的研究。腺苷脫氨酶(ADA)與細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān),ADA及其同工酶在結(jié)核性胸腔積液、腹水、腦積液、唾液中與血清中的比值顯著高于其他疾病;*在結(jié)核病細(xì)胞免疫中起著重要作用,*活性在結(jié)核性胸腔積液和腹水中與血清中的比值也顯著高于其他疾病。因此,ADA及其同工酶的檢測(cè)、*活性的測(cè)定有助于各種結(jié)核病的診斷和鑒別診斷。近年來又陸續(xù)報(bào)道了一些其他酶類的診斷應(yīng)用價(jià)值,如乳酸脫氫酶、*酯酶、*及其同工酶、丙酮酸激
金葡菌特異性鑒別基因2010/12/03
在金葡菌的檢測(cè)方面,近年來很多學(xué)者逐漸探索了一些有很強(qiáng)特異性的鑒別基因,主要包括如下幾種。a.耐熱核酸酶基因(heatstablenuelease,nuc)。耐熱核酸酶(thermostablenuclease,TNase)是金葡菌的特異性酶,通過檢測(cè)TNase酶活性以鑒定金葡菌通常有較好的專一性和準(zhǔn)確性,但也存在一些非金葡菌株可檢測(cè)到該酶活性的例子,其原因尚不清楚,可能是由于其可產(chǎn)生與TNase活性相似的酶。編碼酶蛋白的nuc基因已全部定序。通過nuc基因的特異擴(kuò)增來檢測(cè)金葡菌已被證實(shí)具有非常
激光掃描共聚焦顯維鏡定量分析的注意事項(xiàng)2010/11/24
《一》制備高特異性和價(jià)的熒光抗體標(biāo)本只有在用熒光探針標(biāo)記的前提下才能進(jìn)行共聚焦顯微鏡檢測(cè).制備高特異性和價(jià)的熒光抗體是檢測(cè)的關(guān)鍵。這就要求選用高質(zhì)量的熒光素和高特異性與價(jià)的免疫血清。同時(shí)還要對(duì)熒光抗體進(jìn)行質(zhì)量鑒定,主要是進(jìn)行特異性和敏感性鑒定。《二》標(biāo)本制作要求1.標(biāo)本厚度組織切片或其他標(biāo)本不能太厚,否則激發(fā)光多數(shù)消耗在標(biāo)本下部,而物鏡觀察的上部不能被充分激發(fā)。2.載玻片載玻片要光潔,無自發(fā)熒光;載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,太厚會(huì)吸收較多的光,不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚焦。3.封固劑甘油必
三維圖像與三維結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系2010/11/24
從下面的示意圖中可以看到。當(dāng)一個(gè)處于三維空間內(nèi)的立體結(jié)構(gòu)出現(xiàn)在二維切面上時(shí),特征物的體積則表現(xiàn)為面積;特征物的表面積則表現(xiàn)為邊界線(輪廓);線性結(jié)構(gòu)無論在三維空間內(nèi)如何走行。在二維切面上僅表現(xiàn)為斷面數(shù)(點(diǎn))。因此,經(jīng)嚴(yán)格設(shè)計(jì)的體視學(xué)抽樣方法,通過對(duì)特征物在二維切片的面積測(cè)量,便能獲得它在三維空間內(nèi)的體積;通過對(duì)其邊界線長(zhǎng)度的測(cè)量,便能獲得表面積;通過對(duì)斷面數(shù)的測(cè)量,便能獲得其長(zhǎng)度。三維空間物體在三維切面上的表觀圖三維空間與二維切面參數(shù)的關(guān)系
三維空間內(nèi)務(wù)向同性的概念及各向同性切片的制作2010/11/24
為正確地得到特征物在三維空間內(nèi)長(zhǎng)度和表面積等,必需對(duì)其做方向性隨機(jī)抽樣。如果特征物在三維空間內(nèi)各個(gè)方向均勻分布,即具有各向同性,如腎小體的毛細(xì)血管球,可通過組織作任意方向切片,然后在切片上進(jìn)行二維研究,通過所得二維數(shù)據(jù)推斷特征物的三維結(jié)構(gòu)信息。如果特征物在三維空間內(nèi)呈各向不同性分布,則需通過組織制作各向同性切片,并在其中獲取數(shù)據(jù)。制作各向同性切片的方法有定向法(orientator)和球切法(isector)。球切法:采用有圓形小腔的塑料模具,將組織塊放人小腔內(nèi)包埋,使包埋介質(zhì)(如樹脂)充滿小腔
液相色譜法測(cè)定克倫特羅殘留2010/10/26
(1)試劑和材料①鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品②乙醚;分析純③正己烷:分析純④甲醇:色譜純⑤鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液⑥lmol/I。鹽酸溶液⑦0.05mol/L乙酸緩沖液⑧0.3mol/L乙酸緩沖液⑨lmol/LNaOH溶液’⑩甲醇液:甲醇—重蒸水(75+25)(2)儀器和設(shè)備①液相色譜儀②勻漿機(jī)③旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀④電子天平:感量O.00001g⑤紫外分光光度計(jì)⑥離心機(jī)⑦Silioa小柱⑧AluminaA小柱(3)測(cè)定步驟①提取和凈化取組織樣品10g,加入30mllmol/L鹽酸溶液勻漿,超聲波振蕩3h,5000r/
5種磺胺類藥物殘留的液相色譜法2010/10/26
(1)試劑和材料除特別注明外,所用試劑均為分析純;水為超純水。①磺胺類藥物對(duì)照晶(SMM、SDM、SMz、SMZ和SQ)②甲醇色譜純③乙腈色譜純④正己烷⑤正丙醇⑥*⑦堿性氧化鋁SPE柱每根柱填料量為28⑧磺胺類藥物貯備液(1mg/mi)分別取上述磺胺類藥物對(duì)照晶各約50mg,精密稱定,置同一50ml量瓶,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。置一20~C以下冰箱中保存,有效期3個(gè)月。⑨磺胺類藥物工作液(5Ps/mi)精密量取磺胺類藥物貯備液o.5ml,置100ml量瓶,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得
*殘留檢驗(yàn)的薄層色譜測(cè)定方法2010/10/23
1)試劑和材料除另有規(guī)定外,所用試劑均為分析純?yōu)檎麴s水。1.乙酸乙酯2.二氯甲烷3.正己烷4.三氯甲烷5.特丁醇6.甲醇7.丙酮8.濃鹽酸:密度約1.19g/ml9.氫氧化鈉溶液:10mol/L水溶液10.熒光胺溶液:30rug熒光胺溶于250ml丙酮中,可用于6~9塊展開板11.二乙胺12.展開溶劑:三氯甲烷—特丁醇(80+20),當(dāng)日新配13.*緩沖液:0.2mol/I水溶液。使用前用10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值達(dá)到12.25(本步驟需在使用前、在20C室溫的蒸氣浴上進(jìn)行)。14.磷酸
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