犬細小病毒（CPV）ELISA試劑盒技術資料

【資料簡介】

犬細小病毒(CPV)ELISA試劑盒實驗原理：
本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中犬細小病毒(CPV)抗體。用純化的犬細小病毒(CPV)抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中細小病毒(CPV)抗體相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的細小病毒(CPV)抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOFF值相比較，從而判定標本中犬細小病毒(CPV)抗體的存在與否。

犬細小病毒(CPV)ELISA試劑盒樣本處理及要求：
. 血清：室溫血液自然凝固0-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合0-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到00萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
犬細小病毒(CPV)ELISA試劑盒操作步驟：
.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品0μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘
0.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后5分鐘以內進行。