豚鼠血清一氧化氮（NO）酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書

【資料簡介】

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書原理:

采用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定小尾寒羊阿黑皮素原(POMC)水平。用小尾寒羊阿黑皮素原(POMC)抗原包被微孔板，制成固相載體，實(shí)驗(yàn)

時(shí)依次在微孔板中加入標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品，并加入 HRP 標(biāo)記的POMC抗體，標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)品中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與

固相抗原結(jié)合。反復(fù)洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。

標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，顏色越淺。顏色的深淺和樣品中的POMC含量呈負(fù)相關(guān)。采用酶標(biāo)儀在

450nm 波長測(cè)定吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算測(cè)試樣品中POMC濃度。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書樣品收集、處理及保存

. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以000×g離心5分鐘，收集上清。

2. 細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到04-06/ml 左右，通過反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或

者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以000×g離心5分鐘，取上清待測(cè)。

4. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置0-20 分鐘后，以000×g離心5分鐘，收集上

清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以000×g離心5分鐘，收集上清。

6. 組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱取重量0.5mg，加入500ul的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000

rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)

本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書操作步驟：

. 取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘。

2. 分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)

品組（6 個(gè)濃度）、空白孔、待測(cè)樣品組。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 00ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對(duì)照孔加入 00ul 的蒸餾水；其余微孔中加入

00ul 的待測(cè)樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 50ul 的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

5. 溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 小時(shí)。

6. 洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置 5-30s，充分清洗酶標(biāo)板 5 次，用吸水紙*拍干。

7. 顯色：各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后，再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止：25-37℃下避光反應(yīng) 0-5 分鐘，加入 50ul 終止液。

9. 讀板：在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書注意事項(xiàng)：

. 實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。

2. 加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免*孔與zui后一孔間的時(shí)間間隔過大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響

實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性。

3. 孵育：嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。

4. 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化，如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。

5. 建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

6. 建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，試用幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商，

如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

豚鼠血清一氧化氮(NO)酶聯(lián)免疫（Elisa）試劑盒說明書安全性

．避免人體直接接觸顯色劑A、B和終止液。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2．實(shí)驗(yàn)中不要進(jìn)食、抽煙或使用化妝品。

3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

保存條件及有效期：

.試劑盒保存：2-8℃

2.有效期：6個(gè)月