脂多糖結合蛋白（LBP）ELISA試劑盒說明

【資料簡介】

脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒說明
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：96T
0.2ng/ml -10ng/ml
脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒說明使用目的：
本試劑盒用于測定羊血清、血漿及相關液體樣本中脂多糖結合蛋白(LBP)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中羊脂多糖結合蛋白(LBP)水平。用純化的羊脂多
糖結合蛋白(LBP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂多糖結
合蛋白(LBP)，再與HRP 標記的脂多糖結合蛋白(LBP)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體
復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸
的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂多糖結合蛋白(LBP)呈正相關。用酶
標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中羊脂多糖結合蛋白(LBP)
濃度。
脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒說明試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（16ng/ml）0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
8 ng/ml 5 號標準品150µl 的原倍標準品加入150µl 標準品稀釋液
4ng/ml 4 號標準品150µl 的5 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
2ng/ml 3 號標準品150µl 的4 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
1.0ng/ml 2 號標準品150µl 的3 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
0.5ng/ml 1 號標準品150µl 的2 號標準品加入150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒說明操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。