雞減蛋綜合征病毒抗體（EDSV Ab）試劑盒說明書

【資料簡介】

雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

96T

使用目的：

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)表

達。 實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)表達。用純化的抗

原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)相結合，經洗滌 除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-抗原復合物， 經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下 轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較， 從而判定標本中雞減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)的存在與否。

試劑盒組成

1	30 倍濃縮洗滌液	20ml×1 瓶	7	終止液	6ml×1 瓶
2	酶標試劑	6ml×1 瓶	8	陽性對照	0.5ml×1 瓶
3	酶標包被板	12 孔×8 條	9	陰性對照	0.5ml×1 瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1 瓶	10	說明書	1 份
5	顯色劑 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 張
6	顯色劑 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.     編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.    加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不 觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.     溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.     配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.    洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.     加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.     溫育：操作同 3。

8.     洗滌：操作同 5。

9.     顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.  終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.   測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)陰性 陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為減蛋綜合征病毒抗體(EDSV Ab)陽性

。

注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須 注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

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