ELISA檢測試劑盒洗板不暢

【資料簡介】

    在ELISA檢測試劑盒操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，操作時尤為注意：  
保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後在吸水紙或毛巾（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干（若使用易掉渣的紙，紙屑會留在板孔中，由于紙屑中含有氧化劑而造成高值陰性。）；  
注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋，應按要求稀釋，所用的水電導率在1.5us/cm 之下，洗液如果結晶應待其融解後配制。  
保證洗板浸泡時間為40 秒左右，孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡。  
合理安排，或多用幾臺洗板機。  
在間接法中如本底較高，可增加洗滌次數或延長浸泡時間。  
參考ELISA檢測試劑盒洗滌  
顯 色：  
結果不好的可能原因  
顯色劑配制後放置時間過長或使用過期顯色劑；  
加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。  
解決方法：  
顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；  
加樣時保持顯色劑不外流，且加樣量要準確，順序不能顛倒。  
A、B液應避免接觸金屬器械。  
可以參考ELISA#顯色和比色  
終 止：  
結果不好的可能原因：  
加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。  解決辦法：  
熟悉加樣器的使用，在進行實驗之前用水來練習加樣的快速和準確；  
試驗前標本需緩慢升溫至室溫，若標本為血清，凍結血清融解後，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清後再檢測；  
加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出；  
加樣後及時放入孵箱；  
加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干；  
如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑；  
標本較多時，請分批操作。每次加樣在兩到三分鐘內完成。加標本時三排一加。每次加完樣進行計時；  
參考ELISA檢測試劑盒加樣  
溫 育：  
不好的操作原因：  
溫育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*；  
溫育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。  
解決辦法：  
貼封片或加蓋：為避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜復蓋板孔，反應板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。  
按說明步驟嚴格控制操作時間。  
建議采用空氣浴進行溫育。  
參考ELISA實驗操作中的溫育（incubation）  
洗 板：  
結果不好的可能原因  
采用手工洗板,ELISA檢測試劑盒孔與孔之間液體交叉。  
采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；導致洗板效果差。  
反應板過多造成洗板等待時間長。  
在間接法中如本底較高。