FITC標記抗體-Chadwick氏法

【資料簡介】

 試劑：
      抗體球蛋白溶液、異硫氰酸熒光素、3%重碳酸鈉水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞。
 
      材料：
      離心機及離心管、三角燒瓶（25ml）、冰槽、無菌吸管及毛細滴管、透析袋、玻璃棒、棉線及燒杯（500ml）等。
 
      方法與步驟：
      1.  抗體的準備。用0—4℃ pH8.0的PBS將免疫球蛋白溶液濃度稀釋為30—40mg/ml，置于三角燒瓶內，放入冰槽中；
      2.  熒光素的準備。按每毫克免疫球蛋白加0.01mg熒光素計算，稱取所需的熒光素量，用3%重碳酸鈉水溶液溶解；
      3.  將上述已準備好的抗體與熒光色素溶液等量混合，充分攪拌，使其在0—4℃冰箱中結合18—24h；
      4.  透析。熒光素與球蛋白結合完畢后，將球蛋白的溶液以2500r/min離心20min，除去其中少量的沉淀物后，裝入透析袋中再置于燒杯中，在0—4℃下用pH8.0的緩沖鹽溶液透析過夜；
      5.  過柱。取透析過夜的標記物，過葡萄糖凝膠G-25或G-50柱，分離出游離熒光素，收集標記的熒光抗體進行鑒定。