動物細胞β-半乳糖苷酶活性化學發光法定量檢測試劑盒產品說明書

【資料簡介】

主要用途

動物細胞β-半乳糖苷酶活性化學發光法定量檢測試劑是一種旨在使用化學方法，快速有效地裂解動物細胞，通過高速離心，獲得澄清細胞裂解懸液，在β-半乳糖苷酶反應體系里，以人工合成的二惡二酮類化合物作為發光底物，水解所產生的發光產物，通過發光探測儀（Luminometer）測定其相對冷光單位（RLU）的變化，以此進行測算酶活性的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應用于基因組學、蛋白質組學和其它分子生物學研究。其適用于轉基因后的活體細胞外源性以及衰老細胞內源性半乳糖苷酶活性分析。產品即到即用，性能穩定，參數優化，操作簡便、高度敏感。

技術背景

大腸桿菌的標志基因Lac Z編碼β-半乳糖苷酶（β-galactosidase ； β-gal），在其催化作用下，半乳糖可從乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常穩定，對蛋白水解降解作用抗性強，且容易測試。因此β-半乳糖苷酶成為目前zui常用的報告基因，以評價載體轉染的效果。在衰老細胞內，顯示β-半乳糖苷酶活性。甲氧基二惡二酮氯代金剛烷苯基吡喃半乳糖苷（3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside），是一種二惡二酮（dioxetane）類發光底物，以替代乳糖，在β-半乳糖苷酶（pH7.8）的催化下，去糖基化后，產生二惡二酮，進而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化銨和熒光素鈉（poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein）的啟動反應作用下，同時pH調整到12，由此二惡二酮分解，發出冷光，在冷光儀（475nm波長）下，檢測發光信號，來測定β-半乳糖苷酶的活性。其發光產物半衰期為10分鐘，檢測敏感度可達20飛克（fg）。