毛霉*

【資料簡介】

毛霉操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，毛霉此時不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個風機，就是吹風超凈工作臺，不是過濾培養液的）!

細胞傳代培養（消化法）具體操作：

一：傳代前準備；

1.預熱培養用液：把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。

2.用75％酒精擦拭經過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準備好將要使用的消毒后的空培養瓶，放入微波爐內高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預熱好的培養用液：毛霉取出已經預熱好的培養用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內。

7.從培養箱內取出細胞：注意取出細胞時要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細胞，*消化溫度是37℃。

2. 毛霉 顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養液。

三：吹打分散細胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液。

2.吸細胞懸液入離心管：將細胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機中，以1000轉/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養液：棄去上清液，加入2ml培養液，用滴管輕輕吹打細胞制成細胞懸液。

四：分裝稀釋細胞；

1.分裝：將細胞懸液吸出分裝至2-3個培養瓶中，加入適量培養基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察細胞量，必要是計數。注意密度過小會影響傳代細胞的生長，傳代細胞的密度應該不低于5×105/ml。zui后要做好標記。

五：繼續培養；

用酒精棉球擦拭培養瓶，適當旋松瓶蓋，放入CO2培養箱中繼續培養。毛霉傳代細胞2小時后開始貼附在瓶壁上。當生長細胞鋪展面積占培養瓶底面積25％時為一個＋，占50％為＋＋，占75％時為＋＋＋。  

XY1433    鮭魚胚胎細胞,RTG細胞

XY1434    鮭魚胚胎細胞,CHSE細胞

XY1435    光滑念珠菌

XY1436    光孢短柄帚霉

XY1437    骨髓瘤細胞株 U266細胞,

XY1438    骨髓瘤細胞,SP2/0細胞

XY1439    骨髓瘤細胞,P3X63Ag8細胞

XY1440    骨髓瘤細胞,P3X63Ag8.653細胞

XY1441    骨髓瘤細胞,P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]細胞

XY1442    骨髓瘤細胞,FO細胞

XY1443    骨肉瘤細胞,U-2 OS細胞

XY1444    骨肉瘤細胞,SW1353細胞

XY1445    骨肉瘤細胞,MG-63細胞

XY1446    谷氨酸棒桿菌

XY1447    構巢曲霉

XY1448    腎細胞隆突型 MDCK superdome細胞

XY1449   腎細胞,Super Tube細胞

XY1450    腎細胞,MDCK細胞,

XY1451    腎細胞,MDCK(NBL-2)細胞

XY1452    腎細胞,MDCK (NBL-2)細胞

XY1453    腎上皮細胞,MDCK-EGFP-puro細胞

XY1454    腎惡性組織細胞增生癥細胞,DH82細胞,

XY1455    垂體細胞

XY1456    宮頸癌細胞,HeLa細胞

XY1457    宮頸癌細胞,HeLa 229)細胞

XY1458    宮頸癌細胞,HCE1細胞

XY1459    根土壤桿菌（發根植物單胞菌）

XY1460    睪丸酮叢毛單胞菌

XY1461    睪丸間質細胞瘤細胞,MLTC-1細胞

XY1462    高轉移人肝癌細胞,MHCC97-H細胞,

XY1463    高轉移人肝癌細胞,LM3細胞

XY1464    高轉移卵巢癌細胞,HO-8910PM細胞

XY1465    高轉移肺癌細胞,95-D細胞

XY1466    肝細胞,HL-7702細胞

XY1467    肝卵圓細胞,HOC細胞