小麥萌發前后淀粉酶活力的測定

【資料簡介】

小麥萌發前后淀粉酶活力的測定

一、目的

學習和掌握測定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力的原理和方法。

二、原理

淀粉是植物zui主要的貯藏多糖，也是人和動物的重要食物和發酵工業的基本原料。淀粉經淀粉酶作用后葡萄糖、麥芽糖等小分子物質而被機體利用。淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶兩種。α-淀粉酶可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵，葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時使淀粉的粘度降低，因此又稱為液化酶。β-淀粉酶可從淀粉的非還原性末端進行水解，每次水解下一分子麥芽糖，又被稱為糖化酶。淀粉酶催化產生的這些還原糖能使3,5-二硝基水楊酸還原，棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸，淀粉酶活力越高,這種棕紅色越深，其反應如下：

淀粉酶活力的大小與產生的還原糖的量成正比。用標準濃度的麥芽糖溶液制作標準曲線，用比色法測定淀粉酶作用于淀粉后的還原糖的量，以單位重量樣品在一定時間內的麥芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶存在于幾乎所有植物中。萌發3-4天的小麥種子，淀粉酶活力zui強，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。兩種淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速鈍化。β-淀粉酶不耐熱，在70℃15min鈍化。根據它們的這種特性，在測定活力時鈍化其中之一，就可測出另一種淀粉酶的活力。本實驗采用加熱的方法鈍化β-淀粉酶，測出α-淀粉酶的活力。在非鈍化條件下測定淀粉酶總活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再減去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。

操作步驟

1．淀粉酶液的制備

稱取1g 25℃下萌發3天的小麥種子（芽長約1-1.5cm），置于研缽中，加入少量石英砂和2mL蒸餾水，研磨成勻漿后，將勻漿轉入離心管中，用6mL蒸餾水分次將殘渣洗入離心管。提取液在室溫下放置提取15～20min，每隔２分鐘攪動1次，使其充分提取。然后在3 000r/min轉速下離心10min，將上清液倒入50mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為淀粉酶原液，用于淀粉酶活力的測定。吸取上述淀粉酶原液10mL，放入50mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，即為淀粉酶稀釋液，用于淀粉酶總活力的測定。

取干燥種子或浸泡2.5小時后的小麥種子１g，進行淀粉酶的提取，提取方法同上。

2.麥芽糖標準曲線制作：取7支干凈的具塞刻度試管，編號，按表1加入試劑。

附 注

（1）樣品提取液的定容體積和酶液稀釋倍數可根據不同材料酶活性的大小而定。

（2）為了確保酶促反應時間的準確性，在進行保溫這一步驟時，可以將各試管每隔一定時間依次放入恒溫水浴，準確記錄時間，到達5min時取出試管，立即加入3,5-二硝基水楊酸以終止酶反應，以便盡量減小因各試管保溫時間不同而引起的誤差。同時恒溫水浴溫度變化應不超過±0.5℃。

（3）如果條件允許，各實驗小組可采用不同材料，例如萌發1d、2d、3d、4d的小麥種子，比較測定結果，以了解萌發過程中這兩種淀粉酶活性的變化。