人流行性出血熱抗體（EHF-Ab）ELISA試劑盒使用方法

【資料簡(jiǎn)介】

                                                                     48T

 

使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中流行性出血熱抗體(EHF-Ab)表達(dá)。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)表達(dá)。用純化的人流行性出血熱抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中流行性出血熱抗體相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的流行性出血熱抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人流行性出血熱抗體(EHF-Ab)的存在與否。

試劑盒組成

1	20倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	3ml×1瓶
2	酶標(biāo)試劑	3ml×1瓶	8	陽(yáng)性對(duì)照	0.5ml×1瓶
3	酶標(biāo)包被板	12孔×4條	9	陰性對(duì)照	0.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	3ml×1瓶	10	說(shuō)明書	1份
5	顯色劑A液	3ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	3ml×1/瓶	12	密封袋	1個(gè)

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

 

 

1. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將
2. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
3. 樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
5.  
6. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
7. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
8. 溫育：操作同3。
9. 洗滌：操作同5。
10. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
11. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。