鴨乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒操作方法

【資料簡介】

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)表達。用純化的抗體包被

微孔板，制成固相抗體，可與樣品中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)相結合，經洗滌除去未結合

的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹

底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成

zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而

判定標本中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的存在與否。

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1

孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。