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熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體IgG相關(guān)知識(shí)
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關(guān) 鍵 詞 | 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體IgG,熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體IgG,Anti-VEG |
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熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體IgG相關(guān)知識(shí)
組織的非特異性染色的機(jī)理很復(fù)雜,其產(chǎn)生的原因主要可分為以下幾點(diǎn):
(1)一部分熒光素未與蛋白質(zhì)結(jié)合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去
。
(2)抗體以外的血清蛋白與熒光素結(jié)合形成熒光素脲蛋白,可與組織成分結(jié)合。
(3)除去檢查的抗原以外,組織中還可能存在類屬抗原(如Forssman氏抗原),可與組織中特異性抗原以外之之相應(yīng)抗體結(jié)合。
(4)從組織中難于提純抗原性物質(zhì),所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體,以致容易混淆。
(5)抗體分子上標(biāo)記的熒光素分子太多,這種過(guò)量標(biāo)記的抗體分子帶過(guò)多的陰離子,可吸附于正常組織上而呈現(xiàn)非特異性染色。
(6)熒光素不純,標(biāo)本固定不當(dāng)?shù)取?/span>消除熒光抗體非特異性染色的方法應(yīng)根據(jù)產(chǎn)生的原因采取適當(dāng)?shù)姆椒ǎS玫姆椒ㄓ幸韵聨追N:
(一)動(dòng)物臟器粉末吸收法
常用肝粉(豬、大白鼠或小白鼠),其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50~100mg,在離心管中充分混勻,在室溫中振動(dòng)2h,4℃中過(guò)夜,再攪拌10min,高速離心(3000~15000r/min)30min,1~2次后,即可使用其上清液。吸收一般應(yīng)在臨用前進(jìn)行,吸收后之熒光抗體保存冰箱中勿超過(guò)2周。染色應(yīng)作吸收前后之比較,吸收時(shí)可先用緩沖鹽水將組織干粉浸濕,離心(3000~15000r/min)30min,除去上清液,再加入熒光抗體進(jìn)行吸收,以免消耗過(guò)多的抗體。
肝粉或新鮮細(xì)胞吸收是一種非特異性的消除方法,對(duì)熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時(shí),也可用相同的組織干粉或勻漿沉淀物吸收之。
用臟器肝粉吸收對(duì)熒光抗體損失較多,如果根據(jù)Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液,用生理鹽水洗2~3次,12000r/min
10min離心沉淀,用其沉淀物吸收其熒光抗體即能*達(dá)到目的,京極方久氏認(rèn)為這樣吸收對(duì)熒光抗體幾乎沒(méi)有損失,他們常用此法,效果甚佳,吸收后放置一周左右,用時(shí)有必要再吸收一次。
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