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熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC

2013年02月28日 14:00:29人氣:142來源:上海安研商貿(mào)有限公司

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【資料簡(jiǎn)介】

熒光素標(biāo)記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC

Western bloting要注意的一些問題
1
、為了讓實(shí)驗(yàn)更加嚴(yán)謹(jǐn)有說服力都要設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn),對(duì)照分為:陽性對(duì)照(有標(biāo)準(zhǔn)品(比如β-actinGAPDH)或陽性血清);陰性對(duì)照(測(cè)血時(shí)用相應(yīng)小鼠未免疫血清(即正常血);空白對(duì)照(不加一抗,用PBS代替);無關(guān)對(duì)照(用無關(guān)抗體)
2
、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇zui適當(dāng)?shù)谋壤豢苟沟倪x擇直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及背景的深淺。
3
、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)所釆用的抗原批次要一樣,盡量的避免人為的帶來個(gè)體差異。特別在做裂解液時(shí)更要注意所釆用的操作條件,盡可能的排除可變因素給實(shí)驗(yàn)帶來不確定性。
4
、凝膠的質(zhì)量直接影響以后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,要特別注意幾點(diǎn):凝膠要均一沒有氣泡;積層膠與分離膠界面要水平;APTEMED的量不能過多,太多會(huì)導(dǎo)致膠易脆裂;拔梳子時(shí)要快,盡量保證點(diǎn)樣孔平整。
5
、電泳、轉(zhuǎn)膜時(shí)特別要注意正負(fù)極,電壓電流都不能過高;轉(zhuǎn)膜時(shí)三明治的疊放次序不錯(cuò),同時(shí)要防止產(chǎn)生氣泡;盡量讓電轉(zhuǎn)溫度保持在10度以下,冰浴為宜。
6
、封閉時(shí)一般在室溫下2h就夠了,但是要注意如果是*標(biāo)記的二抗就不宜用牛奶,因?yàn)榕D讨泻?,用BSA效果更好。
7
、加一抗二抗要嚴(yán)格保證反應(yīng)時(shí)間,洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈,有利于降低背景;還要注意一抗二抗的匹配。
8
、在顯色發(fā)光時(shí)要特別注意二抗所對(duì)應(yīng)的顯色方法,特別是在發(fā)光時(shí)要注意發(fā)光時(shí)間和顯影時(shí)間的控制,以看得清楚目的條帶為標(biāo)準(zhǔn)。

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