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熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC
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關 鍵 詞 | 熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC,Anti-SV2A/FITC,熒光 |
- 【資料簡介】
熒光素標記突觸泡蛋白2A抗體IgG,Anti-SV2A/FITC
Western bloting要注意的一些問題
1、為了讓實驗更加嚴謹有說服力都要設計對照實驗,對照分為:陽性對照(有標準品(比如β-actin,GAPDH)或陽性血清);陰性對照(測血時用相應小鼠未免疫血清(即正常血);空白對照(不加一抗,用PBS代替);無關對照(用無關抗體)
2、一抗、二抗的濃度一般要參照抗體說明書選擇zui適當的比例,一抗二抗的選擇直接影響實驗結果以及背景的深淺。
3、實驗設計時所釆用的抗原批次要一樣,盡量的避免人為的帶來個體差異。特別在做裂解液時更要注意所釆用的操作條件,盡可能的排除可變因素給實驗帶來不確定性。
4、凝膠的質量直接影響以后的實驗結果,要特別注意幾點:凝膠要均一沒有氣泡;積層膠與分離膠界面要水平;AP和TEMED的量不能過多,太多會導致膠易脆裂;拔梳子時要快,盡量保證點樣孔平整。
5、電泳、轉膜時特別要注意正負極,電壓電流都不能過高;轉膜時“三明治”的疊放次序不錯,同時要防止產生氣泡;盡量讓電轉溫度保持在10度以下,冰浴為宜。
6、封閉時一般在室溫下2h就夠了,但是要注意如果是*標記的二抗就不宜用牛奶,因為牛奶中含有*,用BSA效果更好。
7、加一抗二抗要嚴格保證反應時間,洗膜要注意盡可能地將一抗二抗洗凈,有利于降低背景;還要注意一抗二抗的匹配。
8、在顯色發光時要特別注意二抗所對應的顯色方法,特別是在發光時要注意發光時間和顯影時間的控制,以看得清楚目的條帶為標準。
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