*對外周血CD3 CD4 CD8 CD20 IL-2 INF-γ影響的研究

【資料簡介】

摘要：目的：觀察硬膜外麻醉下行腰間盤突出髓核摘除術病人外周血免疫相關因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量變化，探討*對淋巴免疫的影響，從而指導圍術期麻醉用藥及管理。方法：收集30例運用*進行硬膜外麻醉實施腰間盤突出髓核摘除術患者麻醉用藥前1h、術后24h及術后48h外周血，利用流式細胞儀測不同時相CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量。結果：術后患者CD3無明顯變化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。結論：運用*麻醉的術后患者T淋巴細胞及B淋巴細胞增多，細胞因子分泌增加，無明顯免疫抑制。

　　關鍵詞：*；免疫；麻醉

　　The Effects of Ropivacaine on the Content of CD3 CD4 CD8 CD20 IL-2 INF-γ

　　Abstract： Objective: To study the effect of ropivacaine on lymphocyte immunity. Method: 30 patients undergoing lumbar diskectomy suffer epidural anesthesia with ropivacaine. Venous blood samples were collected to measure the contents of CD3, CD4, CD8, CD20, IL-2, and INF-γ. Result： After operation, the contents of CD4, CD20, IL-2 and INF-γ were increased, that of CD3 was constant and that of CD8  was decreased. Conclusion： Ropivacatine has not marked influence on lymphocyte immunity.

　　Key words：Ropivacaine; Immunity; Anesthesia
                                                                                           
　　*是一種較新的長效酰胺類局麻藥［1］，目前主要用于硬膜外麻醉和手術鎮痛，運用范圍較廣。目前的研究表明麻醉藥物及疼痛應激反應對手術病人細胞免疫、體液免疫及細胞因子存在一定的影響［2］,而圍手術期患者免疫功能的狀態對術后病人的感染、腫瘤擴散及預后具有重大意義。本研究分析了運用*進行硬膜外麻醉實施腰間盤突出髓核摘除術前、術后病人外周血免疫相關因子CD3、CD4、CD8、CD20、IL-2、INF-γ的含量變化，為*更好的運用提供。

　　1 材料與方法

　　1.1 一般資料：擇期行實施腰間盤突出髓核摘除術病人30例,ASA I～II級，男22例，女8例，年齡18～48歲。

　　1.2 麻醉：病人于T12L1或L1～2硬膜外穿刺，成功后，向頭側置入導管3～4cm，注入0.75%*，麻醉平面控制在T10～5，術中監測ECG、SpO2和BP。病人術中輸注林格液，未用止血藥物、代血漿或輸血，控制輸液量及輸液速度，維持血液動力學平穩。

　　1.3 流式測定：分別于麻醉用藥前1h（T1）、術后24h（T2）和術后48h（T3）抽取靜脈血2ml，加入EDTA-2Na抗凝管中，24h內進行流式細胞儀檢測。采用美國BD公司FACScan型流式細胞儀檢測，所用流式試劑為BD公司提供。CD3、CD4、CD8及CD20測定方法為：取200 μl 抗凝血，加相應熒光標記單抗20 μl，放置30 min，加紅細胞溶解液1 ml，待其透明后3 min離心（2000 r/min，4 min），棄去上清，熒光洗液（PBS＋0.1％NaN3疊氮鈉＋5％小牛血清）或Hanks液1ml洗2遍，0.5 ml洗液懸起，上機，測定。IL-2和INF-γ的測定方法為：淋巴細胞活化以后才分泌細胞因子且迅速分泌到細胞外。因此先利用刺激劑PMA體外激活淋巴細胞，然后用Monensin蛋白轉運抑制劑阻止細胞因子分泌到細胞外，使細胞因子在細胞內滯留到一定的量，再采用流式細胞術細胞內抗原標記進行檢測。

　　1.4 結果統計：計量資料以均數±標準差表示，計數資料應用X2 檢驗，P＜0.05為有顯著性差異。

　　2 結果

　　術后患者CD3無明顯變化，CD4、CD20、IL-2、INF-γ含量升高，CD8含量降低。具體統計結果見表1、2。

　　表1 CD3、CD4、CD8含量變化表　略

　　表2 CD20、IL-2、INF-γ含量變化表　略

　　3 討論

　　手術期間，病人的免疫狀況受諸多因素影響，情緒焦慮、疼痛、麻醉、手術應激和感染等因素都會影響病人的免疫狀況，引發不同組分淋巴細胞在外周血循環中的分布，改變細胞內因子的分泌。目前有研究表明麻醉存在一定的免疫抑制作用，影響病人術后的恢復［3，4］。

　　T淋巴細胞是機體免疫的重要成分，T細胞與其他細胞及細胞因子間的相互作用共同完成免疫識別、活化及殺傷等功能，Th細胞可刺激B細胞產生抗體并輔助其它T細胞完成免疫反應。Ts細胞則具有免疫抑制的功能，Th與Ts細胞相互協調，保證體內免疫功能的正常。B細胞介導機體內體液免疫應答，B 淋巴細胞與T 淋巴細胞相互作用并在Th2細胞輔助下被激活，細胞增殖，成熟并產生抗體，參與體液免疫應答［5］。

　　白細胞介素2（IL-2）是機體內重要的T細胞生長因子，是保障機體正常免疫功能的關鍵，具有多種生物學功能。如：能夠維持活性T細胞增生，誘生LAK細胞，促進B細胞分泌抗體，促進NK細胞產生干擾素，能提高TH細胞數與功能來增強機體的免疫功能等. 與其他的細胞因子，如：sIL2R，IL-6，IL-1，IL-4，TNF等形成動態免疫調節，維持機體正常的免疫調節功能。

　　INF-γ是重要的生長負調節因子，兼有抗病毒復制，抑制腫瘤細胞增殖，調節淋巴系統的功能，增強自身免疫力，INF-γ是主要的巨噬細胞活化因子（macrophage-activating factor，MAF），促進巨噬細胞吞噬能力和炎癥反應，并可直接促進T、B細胞分化和CTL成熟，刺激B細胞分泌抗體，從而增強機體免疫機能。誘導巨噬細胞生成NO的功能。在TNF與脂多糖的適宜刺激下，INF-γ可作為NO生成的合適誘導劑，對抑制腫瘤組織增殖與心血管重塑具有重要意義。同時INF-γ對維持機體自身免疫的穩態具有作用。

　　在本研究中，術后病人CD4、CD20顯著升高，而CD8呈下降趨勢，具免疫抑制功能的Ts細胞濃度下降，Th細胞增多，B細胞增加，這表明患者的T細胞及B細胞反應明顯增強， 同時還觀察到細胞因子IL-2和INF-γ呈逐漸上升的趨勢，這與CD4的變化是相符和的，表明病人體內出現較多的Th0細胞向Th1細胞分化，Th1細胞分泌大量的IL-2和INF-γ增強體內的細胞免疫。通過本研究表明*對病人的T淋巴細胞及B淋巴細胞無明顯抑制作用。

　　［1］Concepeion M，Arthur GR，Steele SM，et al. A new local aneathetic, ropivacaine, its epidural effects in human［Ｊ］. Anesth Analg, 1990, 70: 80-85.

　　［2］焦志華，馬君志. 麻醉、手術對腫瘤患者細胞免疫的影響［Ｊ］. 國外醫學，麻醉學與復蘇分冊,2002,23：303-305.

　　［3］薛靜波,吳虹,魯迎年,等. 大腸癌患者手術前后外周血T 淋巴細胞亞群和血TNF 水平的檢測及意義［J］.肛腸病雜志,1999,19（6）: 12-13.

　　［4］侯建民,陳克能,王社軍,等. 全麻下經胸食管癌切除前后病人外周血TNF、T 淋巴細胞及亞群的改變［J］.中華麻醉學雜志,1998,18（5）: 283-285.

　　［5］Suni MA, Ghanekar SA, Houck DW, et al. CD4 + CD8 low T lymphocytes exhibit enhanced cytokine expression, proliferation and cytotoxic activity in response to HCMV and HIV-1 antigens ［J］. Eur  Immunol, 2001, 31: 512-2520.