人布魯氏菌（Brucellosis）說明書定性

【資料簡介】

人 布魯氏菌（Brucellosis）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。
                                                                                                                                          96T  使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中布魯氏菌（Brucellosis）表達。
實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人布魯氏菌（Brucellosis）表達。用純化的人布魯氏
菌（Brucellosis）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中布魯氏菌（Brucellosis）相
結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的布魯氏菌（Brucellosis）抗
體結合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB在HRP
酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測
定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中人布魯氏菌（Brucellosis）的
存在與否。
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  陰性對照  0.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑 B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
 
 
2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50'l。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40'l，然后再加待測樣品 10'l。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。      
4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標試劑50'l，空白孔除外。   7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50'l，再加入顯色劑 B50'l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50'l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。  
計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品OD 值<  臨界值（CUT OFF）者為布魯氏菌（Brucellosis）陰性
    陽性判定：樣品OD 值≥  臨界值（CUT OFF）者為布魯氏菌（Brucellosis）陽性
。  
注意事項 注意事項 注意事項 注意事項 1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 1530 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；28℃。
2．有效期：6個月 
 

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