雞傳染性法氏囊抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【資料簡介】

【產品名稱】

通用名：雞傳染性法氏囊抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Diagnostic Kit For Antibodies To Infectious Bursal Disease Virus  (ELISA)

【包裝規格】 96T×1/盒

【預期用途】 雞傳染性法氏囊是由傳染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的以破壞雞的中樞免疫器官——法氏囊為主要發病機理的病毒性傳染病，該病病毒損傷法氏囊而導致免疫抑制，使病雞對大腸桿菌、沙門氏菌、雞球蟲等病原更易感。

    本試劑盒適用于：測定雞血清中雞傳染性法氏囊病病毒抗體的相對水平。可用于評估雞群雞傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫狀況分析。

【原    理】

    本試劑盒由預包被雞傳染性法氏囊VP2抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性法氏囊病毒抗體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經溫育后，若樣品中含有雞傳染性法氏囊病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶結合物，在孔中加底物液，與酶標結合物反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性法氏囊病毒抗體。

【試劑盒組成】

序號	名稱	規格/96T×1
1	酶標記物	22ml×1(黃蓋)
2	樣品稀釋液	50ml×1(透明蓋)
3	10X濃縮洗滌液	50ml×1(白蓋)
4	底物液	12ml×1(橙蓋)
5	終止液	12ml×1(藍蓋)
6	陽性對照血清	1.0 ml×1(紅蓋)
7	陰性對照血清	1.0 ml×1(綠蓋)
8	酶標板	96T×1
9	蓋板膜	1
10	自封袋	1
11	說明書	1

 

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2. 用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋（如5ul血清加入195ul樣本稀釋液）稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋成工作洗滌液(如10ml濃縮洗滌液加入90ml的去離子水中)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3. 陰性對照、陽性對照孔分別加入陰性對照血清、陽性對照血清（不用稀釋）100μl；樣品孔每孔加入稀釋好的待測樣本100μL。

4.加樣后，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加滿工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，zui后一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl。蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液100μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，充分混勻，終止后讀數。

【參考值】 實驗正常的情況下，當樣本的S/P≥0.2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性

【檢驗結果的解釋】

在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值。

【試驗方法的局限性】

    1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導致假陽性；長菌的樣本可能導致假陰性。

2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現個別雞只免疫疫苗后檢測結果為陰性。

3．陽性結果用于感染雞的血清學診斷以及流行病學調查時需結合其他診斷方法和臨床資料進行分析。。

【注意事項】

1．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。

2.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。

3.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

4.酶標板從冷藏環境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。

6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

7.用于檢測的樣品應保持新鮮。

8.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。

9.不同批號試劑組分不得混用。