感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率

【資料簡(jiǎn)介】

為確定感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率，可將一定量的完整質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，取一部分轉(zhuǎn)化的細(xì)菌，涂布到選擇培養(yǎng)基上，可用菌落生長(zhǎng)單位/μg DNA，按下面的方法計(jì)算感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率.計(jì)算公式：轉(zhuǎn)化效率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA的總量。

例如，取1μl（0.1 ng/μl）完整的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化100μl的感受態(tài)細(xì)胞. 向轉(zhuǎn)化反應(yīng)液中加入900μl培養(yǎng)液，讓細(xì)菌恢復(fù)一小段時(shí)間，取100μl鋪板.培養(yǎng)過(guò)夜，產(chǎn)生1000個(gè)菌落。轉(zhuǎn)化0.1 ng DNA，用SOC稀釋到1000μl后，取1/10涂平板，則涂平板共用0.01 ng DNA 質(zhì)粒，所以轉(zhuǎn)化率＝1000克隆/0.01 ng DNA =105 cfu/ng=108 cfu/μg。

轉(zhuǎn)化效率1×10 6 cfu/μg DNA可滿足普通的亞克隆實(shí)驗(yàn)；1×10 7 cfu/μg DNA用于作更復(fù)雜的亞克隆，有*的DNA的轉(zhuǎn)化，T-克隆實(shí)驗(yàn)；構(gòu)建文庫(kù)和突變要求用的轉(zhuǎn)化的效率為>1×10 8 cfu/μg DNA。