半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測定試劑盒

【資料簡介】

測定意義：

蛋白質含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉化而來，并且可與胱氨酸互相轉化。Cys參與蛋白質二硫鍵的形成，經常是蛋白質活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調節表皮下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。

測定原理：

Cys還原磷鎢酸生成鎢藍，在600nm處有吸收峰；通過600nm吸光度，計算Cys含量。

自備儀器和用品：

低溫離心機、可調式移液槍、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、磷酸和蒸餾水。

試劑組成和配置：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。用前1天，向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解，再加磷酸0.625mL，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻后加10mL蒸餾水，4℃可保存2周。

標準品：液體×1瓶，1μmol/mL標準液，4℃保存。

半胱氨酸提?。?/span>

1. 液體樣品中半胱氨酸提?。喝?/span>0.1mL液體樣品，加試劑一0.9mL，充分混勻，11000 rpm 4℃離心10min，取上清液，待測。
2. 組織中半胱氨酸提?。悍Q取約0.1 g組織，加入試劑一1 mL，冰上充分研磨，11000 rpm 4℃離心10 min，取上清液待測。

測定操作：

1. 酶標儀預熱30 min以上，調節波長到600 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A空白管。

3. 標準管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL標準液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A標準管。

4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A測定管。

樣品中半胱氨酸含量計算：

1. 按液體樣品的體積計算

半胱氨酸含量（μmol/mL）

=[C標準品×V標準品×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×（V樣總÷V樣）

=10×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)

C標準品：標準品濃度，1 μmol/mL；V標準品：反應體系中加入標準品體積，0.1 mL；V樣：反應體系中加入樣品提取液體積，0.1 mL；V樣總：樣品提取液，1mL。

2. 按鮮重計算

半胱氨酸含量（μmol/g FW）

=[C標準品×V標準品×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×（V樣總÷V樣）÷W

=1×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷W

W：樣品質量，g。