Rosetta 感受態細胞產品說明書

【資料簡介】

               Rosetta Chemically Competent Cell 產品說明書

 

產品規格

Rosetta：                               10×100μl

pUC19（control vector）：10pg/μl               10μl

保存條件：-80℃

 

 

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-)gal dcm(DE3) pRARE(argU，argW，ileX，glyT，leuW，proL)(Cam^R)

 

 

產品說明

 Rosetta 感受態細胞具有抗性，補充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA， AGG， AGA， CUA，CCC， GGA) 對應的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系統中的表達水平，該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶），經pUC19質粒檢測轉化效率高達10⁸cfu/μg。

 

 

操作方法

1. 取100μl冰上融化的Rosetta感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

 

 

注意事項

1. 感受態細胞在冰上融化。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。