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如何培養(yǎng)好PC-3細胞株?
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關(guān) 鍵 詞 | PC-3復蘇,PC-3血清,PC-3技術(shù),PC-3形態(tài),PC-3來源 |
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培養(yǎng)基注意事項:
1):每株細胞株都有它特定使用且已適應的細胞培養(yǎng)基,若使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。
(BNL CL.2細胞信息:貼壁細胞 培養(yǎng)基、血清:90% 高糖DMEM、10% 胎牛血清)
2):更換培養(yǎng)基:視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。
(BRL細胞信息:貼壁細胞 培養(yǎng)基、血清:90% DMEM高糖、10% 胎牛血清)
控制細胞分解葡萄糖(Glucose)的兩個蛋白質(zhì)對干細胞的形成非常重要。向基因組中插入了四個蛋白質(zhì)的基因,使成熟的人類細胞轉(zhuǎn)變成了類早期干細胞的狀態(tài),這一技術(shù)稱為細胞重編程(Reprogramming)。
(大鼠C6細胞 來源:通派細胞庫 大鼠膠質(zhì)瘤細胞)
重編程后的細胞有發(fā)育成任意類型細胞的能力,稱為細胞的多能性。人們一直希望由人類成熟細胞轉(zhuǎn)化成的多能干細胞有朝一日能生成新的組織或器官,用以修復或替代人類的損傷組織或患病組織。
(大鼠RSC96細胞 來源:通派細胞庫 大鼠雪旺細胞)
細胞重編程過程中,它會關(guān)閉由葡萄糖產(chǎn)生能量的新陳代謝通路,該通路發(fā)生在有氧條件下的線粒體,繼而啟用無氧條件下的糖酵解通路。
(小鼠Ana-1細胞 來源:通派細胞庫 小鼠巨噬細胞)
能量產(chǎn)生通路的轉(zhuǎn)變對胚胎細胞和組織干細胞很重要,因為它們必須在低氧環(huán)境下生存。研究通過對缺氧誘導因子1α和2α(Hypoxia-induced factor 1α and 2α,HIF1α和HIF2α)的功能缺失分析。
(人U-2 OS細胞 來源:通派細胞庫 人骨肉瘤細胞)
研究發(fā)現(xiàn)這兩種蛋白質(zhì)對細胞重編程產(chǎn)生干細胞是必需的,會調(diào)控一些下游基因顯著改變細胞行為。為了更詳細地了解HIF1α和HIF2α對細胞的影響,分別激活其中一種,發(fā)現(xiàn)當HIF1α單獨被激活時,細胞進入糖酵解通路,由此產(chǎn)生更多的誘導型多能干細胞。
(小鼠MFC細胞 來源:通派細胞庫 小鼠胃癌細胞)
然而單獨激活HIF2α時,細胞不會轉(zhuǎn)化為干細胞。如果同時激活HIF1α和HIF2α,HIF2α會勝出,阻斷干細胞的形成。深入挖掘發(fā)現(xiàn)HIF2α在細胞重編程初期的確能促進細胞向糖酵解通路轉(zhuǎn)換;
(小鼠RM-1細胞 來源:通派細胞庫 小鼠前列腺癌細胞)
但當該過程持續(xù)時間太長時,HIF2α能上調(diào)腫瘤壞死因子相關(guān)的誘導凋亡配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的表達,該配體會誘導干細胞凋亡,阻斷干細胞的產(chǎn)生。因而,HIF2α既能促進細胞多能性,也能抑制細胞多能性,這取決于細胞重編程的不同時期。
(人U87 MG細胞 來源:通派細胞庫 人腦星形膠質(zhì)母細胞)
這一發(fā)現(xiàn)有助于干細胞研究。首先,可以用HIF1α大量產(chǎn)生干細胞。其次,可以單獨用HIF蛋白質(zhì)或結(jié)合其他的刺激因子誘導產(chǎn)生干細胞,并淘汰插入基因阻斷細胞重編程這種方法。
(猴RF/6A細胞 來源:通派細胞庫 猴脈絡(luò)叢視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞)
該發(fā)現(xiàn)也有助于癌癥研究,HIF1α和HIF2α是正常細胞轉(zhuǎn)化為癌細胞的重要因子,事實上,活性HIF1α的存在是入侵性疾病的標記。研究人員指出,可以通過在惡性腫瘤細胞早期阻斷HIF1α的表達,或者在后期刺激HIF2α的表達來阻斷腫瘤生長。
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