上海酶聯生物研究所作者
293和293T的區別以及培養條件
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1、來源:293細胞是轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系,293T細胞由293細胞派生,同時表達SV40大T抗原,含有SV40復制起始點與啟動子區的質粒可以復制。用Ca3(PO4)2轉染效率可高達50%。蛋白表達水平高,轉染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測到表達的蛋白。瞬時轉染293T細胞是過表達蛋白并獲得細胞內及細胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
2、形態為上皮細胞,貼壁細胞,能致瘤。
3、染色體核型:亞三倍體人細胞系。染色體眾數為64,30%的細胞有64 條染色體。4.2%的細胞染色體數目更多。多數細胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),還有四條標記染色體,有的細胞另有5條標記染色體。der(1)與M8 (or Xq+)常常成對出現。N17 與 N22各有四條。值得注意的是多數細胞有三條X染色體,兩條Xq+,一條Xp+。
4、293細胞系是原代人胚腎細胞轉染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化細胞。表達轉染的腺病毒5的基因。早期報道認為此細胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764],現已清楚僅含有左端序列,此細胞系人腺病毒滴度高。室溫不貼壁,37℃幾日后重新貼壁。表達由整合素beta-1 亞基與玻基結合素受體 alpha-v 亞基組成的玻基結合素細胞表面受體。
5、293:棄培養基,含0.25% *, 0.03% EDTA 消化液洗滌,棄去,加1-2ml消化液室溫或37℃消化。加入新鮮培養基,吸出,分到新培養皿中。一傳二至一傳四。
293T:生長快,通常倍增時間不到一 天 。每3~4 天1:10至1:20稀釋,5% CO2條件下培養。細胞貼壁疏松,可只用EDTA消化,不要用*過度消化。
每兩到三天換 液一次。
6、凍存液:95%培養基;5%,DMSO;
7、培養條件:ATCC培養基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-*,1.5g/L*,0.1 mM必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸鈉;10%加熱滅活的馬血清37℃培養。
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