上海酶聯(lián)生物研究所作者
293和293T的區(qū)別以及培養(yǎng)條件
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上 傳 人 | 上海酶聯(lián)生物研究所 | 需要積分 | 0 |
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- 【資料簡介】
1、來源:293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系,293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生,同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原,含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)粒可以復(fù)制。用Ca3(PO4)2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高,轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較 容易地檢測到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。
2、形態(tài)為上皮細(xì)胞,貼壁細(xì)胞,能致瘤。
3、染色體核型:亞三倍體人細(xì)胞系。染色體眾數(shù)為64,30%的細(xì)胞有64 條染色體。4.2%的細(xì)胞染色體數(shù)目更多。多數(shù)細(xì)胞der(1)t(1;15) (q42;q13), der(19)t(3;19) (q12;q13), der(12)t(8;12) (q22;p13),還有四條標(biāo)記染色體,有的細(xì)胞另有5條標(biāo)記染色體。der(1)與M8 (or Xq+)常常成對出現(xiàn)。N17 與 N22各有四條。值得注意的是多數(shù)細(xì)胞有三條X染色體,兩條Xq+,一條Xp+。
4、293細(xì)胞系是原代人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化細(xì)胞。表達(dá)轉(zhuǎn)染的腺病毒5的基因。早期報(bào)道認(rèn)為此細(xì)胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764],現(xiàn)已清楚僅含有左端序列,此細(xì)胞系人腺病毒滴度高。室溫不貼壁,37℃幾日后重新貼壁。表達(dá)由整合素beta-1 亞基與玻基結(jié)合素受體 alpha-v 亞基組成的玻基結(jié)合素細(xì)胞表面受體。
5、293:棄培養(yǎng)基,含0.25% *, 0.03% EDTA 消化液洗滌,棄去,加1-2ml消化液室溫或37℃消化。加入新鮮培養(yǎng)基,吸出,分到新培養(yǎng)皿中。一傳二至一傳四。
293T:生長快,通常倍增時(shí)間不到一 天 。每3~4 天1:10至1:20稀釋,5% CO2條件下培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁疏松,可只用EDTA消化,不要用*過度消化。
每兩到三天換 液一次。
6、凍存液:95%培養(yǎng)基;5%,DMSO;
7、培養(yǎng)條件:ATCC培養(yǎng)基:90%的MEM Eagle,加入2mM L-*,1.5g/L*,0.1 mM必需氨基酸,1.0 mM 丙酮酸鈉;10%加熱滅活的馬血清37℃培養(yǎng)。
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