D-熒光素鉀鹽*使用說明書

【資料簡介】

D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）

產品名稱	貨號	規格	保存	價格(元)
D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）	C6301L1330	25 mg	-20℃	650

 

產品描述

D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

 

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-*鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成液體后的這三種產品，在絕大多數的應用上都沒有實質性的差別。

產品性質

中文別名（Chinese synonym）	D-熒光素鉀鹽
英文別名（English synonym）	(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt;
CAS號（CAS NO.）	115144-35-9
分子式（Formula）	C11H7N2O3S2 K
分子量（Molecular weight）	318.42 g/mol
外觀（Appearance）	淡黃色粉末
溶解性（Solubility）	溶于水（60 mg/ml）
純度（Purity）（HPLC）	＞99%

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，保質期12個月。

使用方法

1．體外生物發光檢測

1）用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。

2）用預熱好的組織培養基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。

3）去除培養細胞的培養基直至無殘留。

4）待圖像分析前，向細胞內添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。

2．    活體成像分析

1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

 2） 注射量取決于注射方式，具體如下：

注射方式	劑量
靜脈注射（25-27gauge針頭）	按10µl/g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液
腹腔注射（25-27gauge針頭）	按10µl /g體重濃度，加入相應體積的15mg/ml熒光素工作液
肌肉注射（27gauge針頭）	50µl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液
鼻內注射（pipette）	50µl，濃度為3mg/ml熒光素工作液

3） 注射入體內10-20 min（待光信號達到zui強穩定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。

 注意事項

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。

2) 本品保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩定性和保存時間更長，長達1年。

3) 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定信號平臺期和的檢測時間。

4) 熒光素鉀鹽和*鹽應用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發表的文獻來看，鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽，尤其是體內實驗。兩者功效相同。

5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。