日韩午夜在线观看,色偷偷伊人,免费一级毛片不卡不收费,日韩午夜在线视频不卡片

技術中心

免疫組織化學細胞的組織浸蠟和切片

2011年03月08日 16:54:51人氣:946來源:上海莼試生物技術有限公司

資料類型文件資料大小0
下載次數0資料圖片 【點擊查看】
上 傳 人上海莼試生物技術有限公司 需要積分0
關 鍵 詞免疫組織化學細胞的組織浸蠟和切片
暫無上傳相關文件
【資料簡介】

組織經過脫水、透明后置人石蠟中,使組織變硬而利于切片的過程稱為浸蠟。
為了使石蠟*取代組織中的透明劑,必須經3次浸蠟,每次時間為1h左右。本實驗  室蠟的熔點一般為56~58~C,這種熔點的蠟較適中,經過此種石蠟浸透,包埋后切片順利,連續性好,展片平整。
切片是免疫組化準備工作的zui后一步,其切片質量相對于常規組織切片來說要求更高,要切得薄而平整,并注意不可有刀痕。主要有石蠟切片、冰凍切片、塑料包埋切片、碳蠟切片等。在切片前還需對載玻片進行相應的處理。
一、載玻片的處理
免疫組化染色時間長,特別是雙PAP、免疫金銀染色等方法,所需時間更長,并要反復洗滌,切片在試劑中長時間浸泡,經多次洗滌,極易造成脫片而影響實驗的結果。需采用以下方法處理:載玻片先置于洗潔液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min,清水洗干凈后放人清潔液中浸泡12—24h,漂洗,用蒸餾水清洗后置于烤箱內干燥,然后涂以切片黏合劑。
切片黏合劑的配制方法如下。
(1)明礬—明膠的配制方法  明礬、明膠各1g,加入到100ml 1%甘油中,加熱至70~C熔化,并攪拌混合至*透明狀,將切片浸入此液中幾分鐘,也可以涂在載玻片上,36℃2h后即可使用。
(2)合成乳膠—聚醋酸乙烯乳液的配制方法  合成乳膠是一種高分子乳化聚合物,具有高度黏合力,無毒、無臭、無腐蝕性。取合成乳膠10份,加蒸餾水90份,攪拌成10%的使用液備用。載玻片可以浸泡此液中,也可以涂片。浸泡時濃度稀一點;用于涂片濃度高一點,涂完后在36~C中5h后即可使用。
(3)多聚賴氨酸  0.05%多聚賴氨酸(分子質量200kDa)水溶液,臨用時現配,電吹風吹干即可使用。
(4)進口切片黏合劑  此膠屬樹脂膠,國外作為木材的黏合劑。涂膠方法同(1),即直接涂片或浸入涂片。一般買回來的黏合劑需10%稀釋。
(5)甲醛—明膠  1%明膠5mi,2%甲醛5ml,混合即可涂片。
(6)明膠—鉻明礬—戊二醛黏合劑  載玻片在10%Extron中65℃清洗60min,用熱水沖洗60min,雙重蒸餾水洗2次,空氣干燥,然后浸在0.5%明膠—0.05%鉻明礬液(注:先將0.5%明膠60~C溶解,冷卻后加入鉻明礬)中,40~C浸浴lmin,空氣干燥,用0。2%戊二醛(PBS配制)固定60min,PBS洗后,切片空氣干燥,于4~C保存。
(7)白膠—多聚賴氨酸混合液—取進口切片黏合劑10ml,加10mg多聚賴氨酸混勻,即可用于涂片。
二、石蠟切片
石蠟切片不僅是常規病理中的重要切片形式,也是免疫組化研究中較常用的切片形式,它能滿足免疫組化的連續切片要求。為了便于染色及觀察,切片時應注意:①連續切片時應按順序分離及貼片,不應顛倒;②貼片時應距載玻片一端至少1cm,一般靠一邊,以利于顯色安全;③用于免疫組織化學染色的蠟溫應為56—58℃,切片水溫在40℃左右,應先置于冷水中,然后再移人熱水中,這樣可以使切片能順利展平;④切片刀要求快,切片要薄,無刀痕和皺褶,在染色時可減少非特異染色;⑤烤片時要注意,抗原性較強的組織可在60℃烤3—8h,抗原較弱的組織可于37℃恒溫箱內過夜;⑥切片如需長期保存,可置于4℃或室溫下,千萬不可脫蠟后4℃保存,因脫蠟后失去了對抗原決定簇的保護。
三、冰凍切片
冰凍切片的優點是能較完整地保存抗原性。組織細胞的某些抗原成分,特別是細胞膜抗原、受體抗原、酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中,可不同程度遭受破壞或失去抗原性,而冰凍切片就能zui大限度地保護抗原。缺點是在冷凍過程中形態結構可能破壞,抗原易彌散,不能用于常規病檢及回顧性研究。
目前大多采用恒冷箱冰凍切片機,將新鮮組織置于-25℃左右的恒冷箱中,待組織*冷凍后即可連續切片。其注意事項:①切片刀要快,并且預先冷凍,恒冷箱的溫度一般調至-25℃左右,不能太低,否則組織表面易出現冰渣;②抗卷板的位置要適中,否則難成片;③貼片時動作輕而迅速,否則易出現皺褶;④組織從液氮內或-80℃取出,必須進行溫度平衡后才能切成片,切完的組織如下次還用,應用冷凍頭在沒有*溶解前取下,密閉后低溫保存。
切片后,應用電吹風冷風吹干或自然干燥。如在短時間內用,可全部進行固定,固定后,PBS洗,吹干后低溫冰箱內保存。
四、碳蠟切片http://www.kindlingtouch.com/Login/default?Stand_DownLoadOperate
碳蠟切片與石蠟切片相似,碳蠟是水溶性蠟,因此切片時不需用水展片,只需貼在載玻片上,吹干即可。切好片應把碳蠟塊密閉保存在干燥器內。另外,碳蠟切片不需脫蠟至水,切片可直接入水進行各種染色。

上海莼試生物技術有限公司作者

上一篇:兔子免疫球蛋白A(IgA)酶聯免疫分析 ELISA kit

下一篇:人促黃體生成素(LH)定量檢測 ELISA kit


我要投稿
  • 投稿請發送郵件至:(郵件標題請備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯系電話0571-87759680
環保行業“互聯網+”服務平臺
環保在線APP

功能豐富 實時交流

環保在線小程序

訂閱獲取更多服務

微信公眾號

關注我們

抖音

環保在線網

抖音號:hbzhan

打開抖音 搜索頁掃一掃

視頻號

環保在線

公眾號:環保在線

打開微信掃碼關注視頻號

快手

環保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關注
意見反饋
主站蜘蛛池模板: 淮南市| 泗阳县| 南充市| 淳安县| 海门市| 芒康县| 拉孜县| 琼结县| 安丘市| 平度市| 静宁县| 车致| 屏南县| 清新县| 漠河县| 温宿县| 古浪县| 应用必备| 囊谦县| 嘉峪关市| 济南市| 遵义县| 离岛区| 荔波县| 额济纳旗| 平昌县| 宿州市| 平原县| 武乡县| 巴林右旗| 临清市| 珲春市| 滨州市| 枝江市| 仁布县| 广水市| 石屏县| 武乡县| 丰城市| 旬阳县| 都兰县|