雞雌激素（E）酶聯免疫分析試劑盒檢測原理

【資料簡介】

雞雌激素（E）酶聯免疫分析試劑盒實驗原理 
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞雌激素（ E） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雌激素（E），再與 HRP標 記的雌激素（E）抗體 ，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 。用純化的雞雌激素（E） 顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深 淺和樣品中的雌激素（E）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通 過標準曲線計算樣品中雞雌激素（E）濃度。 
試劑盒組成 標本要 
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過 （HRP）活性。
雞雌激素（E）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作步驟 
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。 
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 溫育：用封板膜封板后 37℃溫育30分鐘。 30倍稀釋后備用 配液：將 30倍濃 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜 重復 5次，拍干。 30秒后棄去，如此 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。 溫育：操作同 3。 洗滌：操作同 5。 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10分鐘. 10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止 液后 15分鐘以內進行。 操作程序總： 計算 以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上 ，根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD值計算出標 準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實際濃度。 
雞雌激素（E）酶聯免疫分析試劑盒注意事項 
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。 
2．濃洗滌液可能會有 析出，稀釋時可在浴中加溫助溶，洗滌時不影響 
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。 
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值 大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉
 6．底物請避光保存。 
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗 
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 
9．本試劑不同批號組分不得混用。 
雞雌激素（E）酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期 
1．試劑盒保存：；2-8℃。 
2．有效期：6個月