*（glutamic acid，Glu）含量試劑盒

【資料簡介】

*(glutamic acid，Glu)含量測定試劑盒說明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 測定意義：
Gu 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一， 而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此外，Glu 還是 味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
*(glutamic acid，Glu)含量測定試劑盒說明書測定原理：
利用提取液提取，然后用顯色劑進行顯色，顯色后在 570nm 下進行測定。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶， 4℃保存；臨用前加入 10mL 蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑 仍 4℃保存。
*提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞樣品：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞 數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 1000  萬細菌或細胞加入 2mL 試劑一），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重 復(fù) 30 次）；8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。 2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組 織，加入 2mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。 3、血清（漿）或細胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細胞培養(yǎng)液體積（mL）：試劑一體積 (mL)為 1：5~10 的比例（建議取 0.2mL 血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液加入 2mL 試劑一），進 行冰浴勻漿。8000g  常溫離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 570nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 在有蓋 EP 管中加入下列試劑：
試劑名稱（μL）    測定管    對照管
樣本    1000    
試劑一        1000
試劑二    200    200
混勻，90℃水浴 20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于 570nm 波長處比色，△A=A
測定管-A 對照管。對照管只要做一管。 
*(glutamic acid，Glu)含量測定試劑盒說明書注意事項：
為提高檢測靈敏度，測定管的吸光值應(yīng)小于 1，若大于 1 則需要將上清液用試劑一稀釋至適 當倍數(shù)后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

*含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423； x 為*含量（µg/mL），y 為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細胞培養(yǎng)液體積計算
*含量(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2）=304.9×(△A+2.423)
3、按照蛋白濃度計算
*含量(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計算
*含量(µg/g 鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W
5、按照細菌或細胞密度計算
*含量(μg/104 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿） 或細胞培養(yǎng)液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000： 細菌或細胞總數(shù)，1000 萬。 注意：該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中*含量測定，檢測下限為 70µg/mL。