人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒工作原理

【資料簡介】

人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)的水平。向預先包被了人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)單克隆抗體的酶標孔中加入8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)，溫育；溫育后，加入標記的抗8-OHDG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)的濃度呈正相關。
注意事項
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。
嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 
人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作程序
標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
64ng/ml
（5號標準品）
120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
32ng/ml
（4號標準品）
120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
16ng/ml
（3號標準品）
120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
8ng/ml
（2號標準品）
120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
4ng/ml
（1號標準品）
120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，標記的抗8-OHDG抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50μl，-HRP50μl（標準品中已事先整合好抗體，故不加）；3)待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- 8-OHDG抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。