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小鼠白細胞介素8(IL-8 )Elisa試劑盒使用說明書
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關 鍵 詞 | 小鼠白細胞介素8,IL-8 ,Elisa試劑盒 |
- 【資料簡介】
小鼠白細胞介素8(IL-8 )Elisa試劑盒實驗原理 :
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白細胞介素 8(IL-8)水平。用純化的小鼠
白細胞介素 8(IL-8)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素 8(IL-8),再與 HRP 標記的白細胞介素 8(IL-8)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 8(IL-8)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素 8(IL-8)濃度。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存
說明書 份 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 個 個
酶標包被板 ×48 ×96 2-8℃保存
標準品:35pg/mL 0.5ml× 瓶 0.5ml× 瓶 2-8℃保存
標準品稀釋液 .5ml× 瓶 .5ml× 瓶 2-8℃保存
酶標試劑 3 ml× 瓶 6 ml× 瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml× 瓶 6 ml× 瓶 2-8℃保存
顯色劑 A 液 3 ml× 瓶 6 ml× 瓶 2-8℃保存
顯色劑 B 液 3 ml× 瓶 6 ml× 瓶 2-8℃保存
終止液 3ml× 瓶 6ml× 瓶 2-8℃保存
20 倍濃縮洗滌液 20ml× 瓶 30ml× 瓶 2-8℃保存
小鼠白細胞介素8(IL-8 )Elisa試劑盒樣本處理及要求:
.血清:室溫血液自然凝固 0-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合 0-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 00 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘2左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
操作步驟
. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 0 孔,在*、第二孔中分別加標準品 00µl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50µl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取 00µl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl 棄掉,再各取 50µl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取 50µl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50µl,混勻后從第九第十孔中各取 50µl 棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50µl,濃度分別為 90 pg/mL,60 pg/mL ,30 pg/mL,5 pg/mL,7.5 pg/mL)。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 0µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5 分鐘.
0. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 5 分鐘以內進行。
注意事項 :
. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 5-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內,如標本數(shù)量多,使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔*孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
0. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
計算 :
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD
值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
試劑盒性能 :
.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2.批內與批見應分別小于 9%和 %
檢測范圍 :
5 pg/mL -00 pg/mL
保存條件及有效期 :
.試劑盒保存:2-8℃。
2.小鼠白細胞介素8(IL-8 )Elisa試劑盒有效期:6 個月
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