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大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)說明書 北京

2012年05月18日 08:54:49人氣:787來源:上海江萊生物科技有限公司

本公司為ELISA試劑盒供應(yīng)商,價(jià)格公正,售前,售中,售后全程為您服務(wù)。提供免費(fèi)代測服務(wù),咨詢!

大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 

目的:本試劑盒用于測大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中前列腺酸性磷酸酶(PAP)含量。

實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)水平。用純化的大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入前列腺酸性磷酸酶(PAP),再與HRP標(biāo)記的前列腺酸性磷酸酶(PAP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺酸性磷酸酶(PAP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度OD,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

248

296

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:2700ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20×1

20ml×30×1

2-8℃保存

注意事項(xiàng):

1  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4  請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)n后再測定,計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)×n×5

5  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6  底物請避光保存。

7  嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右2000-3000轉(zhuǎn)/。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的HRP活性。

操作步驟

1.        標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1800ng/L1200ng/L 600ng/L300ng/L 150ng/L

2.         加樣:分別設(shè)空白孔空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl樣品zui終稀釋度為5加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.         配液:將3048T20倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍稀釋后備用。

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度OD 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%11%

檢測范圍:

100ng/L -2000ng/L

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:2-8

2.有效期:6個(gè)月

 

 

 本公司為國內(nèi)試劑盒供應(yīng)商之一,質(zhì)量保證。

公司主頁:

 

關(guān)鍵詞:酶標(biāo)儀
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