皮張炭疽沉淀反應操作技術

2011年05月23日 09:38:18人氣：1812來源：上海銳谷生物科技有限公司

①器械與藥品準備

a．設備器材。大型高壓滅菌器，自動揀皮器、半自動揀皮器或手工揀皮器，反應管木架與盤，20ml容量瓶與盤，過濾漏斗，各種量杯，各種容瓶，抗原與血清加注器，帶乳頭的毛細管，中性濾紙（中性石棉），大恒溫箱等。

b．藥品與反應成分。

0．85％生理鹽水。

浸皮液：氯化銨0．85g（鹽皮不加氯化鈉）6。0—8．0。*0．3—0．5g，蒸餾水100ml，pH6.0-8.0

炭疽菌粉標準抗原、炭疽沉淀素血清、陰性血清，均由獸醫生物藥品廠供應。

②檢樣

a．被檢皮張，應存放在庫或的地方，須與檢疫合格的皮張分開存放，嚴防污染。

b．每批被檢疫皮張按同產地、同種皮編成一個報檢號，每100張或50張為一捆，或碼成一垛，每批放在一處。

c．在每張皮的腿部或腋下邊緣部位，揀取樣皮一塊約1g，復檢時仍在*次揀樣的附近部位揀取樣皮一塊約20g，供作檢疫材料。

d．樣皮應裝入特制的布袋內（也可用其他容器），每袋應制成100個小格，并編成1—100個袋號（稱百格袋），按其揀樣順序，將樣皮依次裝入小格袋內，皮張號、樣皮號與袋格號應一致，逐個將樣皮袋嚴密包裝送往消毒室。

e．皮垛的編號應與裝樣皮的布袋號相一致。鹽皮、鮮皮及凍皮必須分開揀樣，不得混摻。

f．檢樣完畢的皮張，在未收到檢疫結果通知單前，必須保持原狀，不得分類、包裝、加工和移動。

g．檢樣人員應進行炭疽預防免疫和具有一定防疫知識，在工作前應穿好*，工作后，應充分消毒洗手，工作服須高壓滅菌，要嚴格遵守防疫衛生制度。

h．每次檢樣時，獸醫檢疫人員應在現場負責指導監督。

③消毒

a．收到樣皮后，應按送檢單內容進行登記。

b．高壓滅菌器用前應進行檢查，然后將樣皮袋放人高壓滅菌器內，使壓力升到103kPa （15lb）（121℃）保持30min。

c．干皮與濕皮應分別消毒，‘如一次滅菌，干皮放上邊，濕皮放下邊，但濕皮、鮮皮和凍皮于滅菌前應在37～38℃恒溫箱中放置48h，或放于室溫3～4天，令其干燥后再進行滅菌。

d．在操作中，應按檢驗炭疽病的防疫要求，不得污染周圍環境和物品，用后的器械物品應及時消毒處理。

④被檢皮張抗原的制備

a．將清潔干燥的容瓶放在木盤上，排成5列（或者10列），每列10只，每盤50瓶（或100瓶），經滅菌后，修剪除去脂肪的樣皮，按規定的質量，每2張裝入一個容瓶內，自左起第1排第l瓶放1—2號，第10瓶放19—20號，余類推，第5排第50瓶放99—100號皮樣。容瓶位置不得混亂，第1瓶和第50瓶應做記號。

b．如有缺皮或樣皮混亂時，須將相應的容瓶翻扣起來，以免錯號。

巳裝樣皮的木盤編號與樣皮袋號應一致，同時將編號卡片放在木盤外側的號夾中，得遺失。

d．按l：10的比例將浸皮液*生理鹽水逐瓶加入20ml，在10～20~C的室溫條件下浸泡16～24h，也可在8～14~C水浴中浸泡14—20h。

e．以清潔無污染的容瓶與漏斗<每漏斗放以疊好的中性濾紙），每10個為l排，每盤5排計50個，其各個編號應與樣皮木盤各個編號相一致。然后對號濾過，應使皮張抗原濾到澄清透明為止。

f．將濾過透明之皮張抗原木盤編號卡片，放在木盤外側的號夾中，應不得忘記和丟失。

⑤炭疽沉淀反應操作方法

a．炭疽沉淀素血清應為黃色透明，無溶血現象。振蕩渾濁的血清，濾過透明后，方能使用。凍過的血清應不用。開封后的血清，應在1—3日內用完。不同批號的血清不能混用。血清應保存在2～14~C冷暗處，保存期為2年。

b．本反應應須在15—20~C以上的室溫下進行。

巳實施本反應前須按下列要求做好預備試驗。

炭疽沉淀素血清，對1：5000倍標準炭疽菌粉抗原在lmin內應是標準陽性反應。對已知陽性皮張抗原經15min應呈陽性反應。

炭疽沉淀素血清對已知陰性皮張抗原和生理鹽水作用15rain應呈陰性反應。

陰性血清對1：5000倍標準炭疽菌粉抗原和已知陰性皮張抗原經15min作用應呈陰性反應。

d．將反應管按皮張抗原木盤內的編號順序排好，以血清加注器（或帶乳頭毛細管）向

反應管內加注炭疽沉淀素血清o．1一o．2ml。然后以抗原加注器吸取等量的抗原，沿反應管壁徐徐加入，并記錄加完后的時間，按加完的時間順序排好待判。

e．血清與皮張抗原的接觸面界限清晰，明顯可見，界限不清者應重做。血清與抗原加注器（或毛細管）應以生理鹽水充分*洗滌后方可繼續使用。

f．如為鹽皮抗原，應在炭疽沉淀素血清中加入4％化學純氯化鈉后，方能做血清反應。

⑥判定

a．判定時，左手取出木盤中的裝有10只反應管的木條，然后將反應管置于水槽中蘸水取出，放于眼睛平行位置，右手持黑色板襯于反應管的后面，在光線充足處進行觀察與判定。須按下列標準記錄結果。

b．“+”：抗原與血清接觸后，經15min，在兩液接觸面處出現致密清晰、明顯的白環，為陰性反應。

“土”：白環模糊、不明顯者，為疑似反應。

“一”：兩液接觸面清晰無白環者，為陰性反應。

“O”：兩液接觸面界限不清，或其他原因不能判定者，為無結果。

巳對可疑和無結果者，須重做1次。用過的一切用具，應充分洗滌，使之清潔無污，干燥后再用。

⑦復檢

a．病皮復檢時，應單張檢驗。初檢呈陽性和疑似的材料，須重新對同一浸泡瓶的兩個皮張號揀樣復檢。復檢時應使用2～3個血清效價與初檢血清效價相近的不同批號的沉淀素血清來進行，同時用陽性血清做對照。復檢的方法同初檢。

b．復檢材料呈陽性反應時，則判為炭疽沉淀反應陽性。復檢再呈疑似反應時，須按陽性皮張處理。

c．經確定某號為陽性病皮后，應將病皮及上下相鄰之污染皮準確地挑出，均作病皮處理，并蓋病皮戳印，保管于庫或地方隔離。病皮、污染皮未經消毒，不得做合格皮處理。

d．皮張檢疫結束后，應將結果填人檢疫簿中，并開檢驗結果通知單。

⑧以有效的方法對病皮進行消毒，并經效果鑒定合格者，方能加工投產應用。

關鍵詞：高壓滅菌器恒溫箱

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