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水中微生物的檢驗(yàn)

2011年05月12日 10:07:45人氣:1724來源:青島海博生物技術(shù)有限公司

1 基本原理
細(xì)菌總數(shù)是指水樣在一定條件下培養(yǎng)后所得1ml水樣所含菌落的總數(shù)。
總大腸菌群系指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要來源于人畜糞便,具有指示菌的一般特征,故以此作為糞便污染指標(biāo)評價(jià)飲水的衛(wèi)生質(zhì)量。水中總大腸菌群數(shù)系以100ml水樣中污染的總大腸菌群zui可能數(shù)(MPN)表示。
按國家飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,1毫升自來水中雜菌數(shù)不得超過100個(gè),大腸菌群數(shù)1000毫升水中不得超過3個(gè)才算合格。
2 材料
營養(yǎng)瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、酒精、棉簽、培養(yǎng)皿、無菌廣口瓶
3 方法
3.1 采樣(自來水):先將水打開,放水1~2分鐘后,關(guān)閉水。用酒精棉球灼燒三分鐘滅菌,再開放水使水流5分鐘,用無菌瓶收集水樣。
3.2 細(xì)菌總數(shù)檢查:
3.2.1 用滅菌吸管吸取1ml水樣,注入滅菌培養(yǎng)皿中,共做2個(gè)。
3.2.2 分別傾注約15ml已熔化冷卻至45℃左右的營養(yǎng)瓊脂,混勻后置37℃培養(yǎng)24小時(shí)進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),同時(shí)應(yīng)作一空白對照。兩個(gè)培養(yǎng)皿的平均菌落數(shù)即為水樣1ml中的細(xì)菌總數(shù)。
3.3 大腸菌群數(shù)檢查:  
乳糖發(fā)酵試驗(yàn)→分離培養(yǎng)→證實(shí)試驗(yàn)→報(bào)告
3.3.1 乳糖發(fā)酵試驗(yàn):
自來水的接種方法:在2個(gè)裝有50ml三倍料乳糖膽鹽發(fā)酵液的三角瓶中,各加入100ml水樣;在10支裝有5ml同樣發(fā)酵的試管中,各加入10ml水樣,混勻。將上述各發(fā)酵管(瓶)置36±1℃溫箱內(nèi),培養(yǎng)24±2小時(shí),觀察結(jié)果。如所有發(fā)酵管都不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸菌群陰性;如有產(chǎn)氣者,則按下列程序進(jìn)行。
3.3.2 分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣的發(fā)酵管用接種環(huán)分別以劃線法轉(zhuǎn)接于伊紅美蘭瓊脂平板上,置36±1℃溫箱內(nèi),培養(yǎng)18~24小時(shí),取出觀察菌落形態(tài)。
3.3.3 證實(shí)試驗(yàn):在每個(gè)平板上,挑取可疑菌落(紫黑色或淡紫紅色,有或略有或沒有金屬光澤的菌落)1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置36±1℃培養(yǎng)24±2小時(shí)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn),觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報(bào)告為大腸菌群陽性。
4 報(bào)告
每毫升自來水所含菌落數(shù)以個(gè)/mL表示;根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù),查大腸菌群檢索表,報(bào)告每升水樣的大腸菌群的zui可能數(shù)。
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