上海源葉生物科技有限公司作者
(1)試劑和材料 以下所用的試劑,除特別注明外均為分析純試劑,水為符合GB/T6682規定的二級水。
①* 含*不得少于99.0%
②* 含*不得少于99.0%
③乙腈:色譜純
④三乙胺
⑤氫氧化鈉
⑥磷酸二氫鉀
⑦磷酸
⑧5.0mot兒氫氧化鈉溶液:取氫氧化鈉飽和溶液14ml,加水稀釋到100ml;
⑨0.03mot/L氫氧化鈉溶液:取5.0mol/L氫氧化鈉溶液o.6ml,加水稀釋到100ml。
⑩0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液(pH 2.4):取85%的磷酸3.4ml,加水稀釋到1000ml,攪拌下滴加三乙胺,調pH值至2.4。
⑾磷酸鹽緩沖液(用于肌肉、脂肪組織):取磷酸氫鉀6,88,加水溶解并稀釋至500ral,用lOmol兒氫氧化鈉溶液調pH值至7.0。
⑿磷酸鹽緩沖液(用于肝臟、腎臟組織):取磷酸氫鉀&8g,加水溶解并稀釋至600ml,調pH值為4.0~5.O。
⒀*、*標準貯備液:稱取*、*對照晶各50mg,用o.03mol/L氫氧化鈉溶液溶解并稀釋成濃度為lmg/mI的貯備液,置2~8℃冰箱中保存,有效期為1個月。
⒁*、*標準工作液:準確量取適量*、*標準貯備液,用乙腈稀釋成適宜濃度的*、*標準工作液。
(2)儀器和設備
①液相色譜儀(配熒光檢測器)
②分析天平 感量0.0001g
③天平 感量O.01g
④渦旋振蕩混合器
⑤組織勻漿器
⑥離心管 25m1、
⑦固相萃取裝置
⑧離心機
⑨C18固相萃取柱
(3)測定步驟
①提取 稱取(2i 0.05)z試料,置于30ml勻漿杯中,加磷酸鹽緩沖液10.0ml,1]0000r/min勻漿llnin。勻漿液轉入50ml離心管中,振蕩混合5min,4000r/min離心10rain,上清液轉入另一25ml離心管中。用磷酸鹽緩沖液10.0mi洗刀頭及勻漿杯,轉入50ml離心管洗殘渣,攪勻,振蕩,離心。合并上清液于25ml離心管中,備用。
②凈化 Cis固相萃取柱依次用2ml甲醇、2ml潤洗,潤洗完畢后,準確量取適量備用液過柱,用2ml水洗,擠干。加2.0ml流動相洗脫,擠干。收集洗脫液作為試樣溶液,供液相色譜分析。
③標準曲線的制備 準確量取適量*、*標準工作液,用流動相稀釋成濃度為0.002ug/ml,0.005ug/m1,0.01ug/ml,0.05ug/m1,0.10ug/m1,O.30ug/ml,0.50ug/ml的*、*標準溶液,供液相色譜分析。
④測定
a.色譜條件
色譜柱:C18 250mm×4.6mm(內徑),粒徑5/tm,或相當者。
流動相:0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺—乙腈(82+18)
流速:0.8mi/mid。
檢測波長:激發波長280nm;發射波長450nm
進樣量:20uL。
b.測定 取適量試樣溶液和相應的標準工作溶液,作單點校準或多點校準,以色譜峰面積積分值定量。標準工作液及式樣液中的*、*響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內。在上述色譜條件下,*、*的保留時間分別在11min和8min左右。
⑤空白試驗 取空白試料,采用*相同的測定步驟進行平行操作
(5)靈敏度和回收率
本方法在雞的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟組織中的檢測限為*20ug/kg、*在5~20ug/kg
在2~20ug/kg添加濃度水平上,回收率范圍為79.27%~98.74%。
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