你在液相色譜使用過(guò)程中是不是會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，別擔(dān)心，本文針對(duì)色譜圖的異常問(wèn)題進(jìn)行了整理，并給出解決方法，供大家參考。

一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰

解決方法：流動(dòng)相吸收本底高；進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣；樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。

所有峰均為負(fù)峰

解決方法：信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒；光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。

所有峰均為寬峰

解決方法：系統(tǒng)未達(dá)到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多；色譜柱尺寸及類(lèi)型選擇不正確；色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。

所出峰比預(yù)想的小

解決方法：樣品黏度過(guò)大；進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差；檢測(cè)器設(shè)置不正確．定量環(huán)體積不正確；檢測(cè)池污染；檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題。

保留時(shí)間變化

可能的原因:解決方法

1.柱溫變化:柱恒溫

2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱

3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液

4.柱污染:每天沖洗柱

5.柱內(nèi)條件變化:穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相

6.柱快達(dá)到壽命:采用保護(hù)柱

保留時(shí)間縮短

可能的原因:解決方法

1.流速增加:檢查泵,重新設(shè)定流速

2.樣品超載:降低樣品量

3.鍵合相流失:流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向

4.流動(dòng)相組成變化:防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀

5.溫度增加:柱恒溫

保留時(shí)間延長(zhǎng)

可能的原因:解決方法

1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡

2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化:用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱

3.鍵合相流失:流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向

4.流動(dòng)相組成變化:防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀

5.溫度降低:柱恒溫

肩峰

可能的原因:解決方法

1.樣品體積過(guò)大:用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于峰的15%

2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng):采用較弱的樣品溶劑

3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品

5.進(jìn)樣器損壞:更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子

鬼峰

可能的原因:解決方法

1.進(jìn)樣閥殘余峰:每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗

2.樣品中未知物:處理樣品

3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑

5.水污染(反相):通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用HPLC級(jí)的水

基線噪聲

可能的原因:解決方法

1.氣泡(尖銳峰):流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓

2.污染(隨機(jī)噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑

3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲:更換氘燈

4.電干擾(偶然噪聲):采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)

5.檢測(cè)器中有氣泡:流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓

峰拖尾

可能的原因:解決方法

1.柱超載:降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相

2.峰干擾:清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相，使用更長(zhǎng)的色譜柱

3.硅羥基作用：加三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值，鈍化樣品

4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼，加在線過(guò)濾器，過(guò)濾樣品

5.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

6.死體積或柱外體積過(guò)大:連接點(diǎn)降至低，對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管

7.柱效下降:用較低腐蝕條件，更換柱，采用保護(hù)柱，活化色譜柱

峰展寬

可能的原因:解決方法

1.進(jìn)樣體積過(guò)大:用流動(dòng)相配樣，總的樣品體積小于峰的15%

2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散

3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)

4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大:設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣峰半寬的10%

5.流動(dòng)相粘度過(guò)高:增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相

6.檢測(cè)池體積過(guò)大:用小體積池,卸下熱交換器

7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng):等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫

8.柱外體積過(guò)大:將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至小

9.樣品過(guò)載:進(jìn)小濃度小體積樣品

峰分叉

可能的原因：解決方法

1.保護(hù)柱或分析柱污染：取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧Ｈ绻麊?wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2.樣品溶劑不溶于流動(dòng)相：改變樣品溶劑，如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。

基線漂移

可能的原因：解決方法

1、柱溫波動(dòng)（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類(lèi)檢測(cè)器）：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器

2、流動(dòng)相不均勻（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移）：使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。

3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）

4、檢測(cè)器出口阻塞（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線）：取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。

5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化：更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。

6、柱平衡慢：特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)，用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。

7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成：檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。

8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整：重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。

10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在大吸收波長(zhǎng)處：將波長(zhǎng)調(diào)整至大吸收波長(zhǎng)處。

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