你在液相色譜使用過程中是不是會遇到各種各樣的問題，別擔心，本文針對色譜圖的異常問題進行了整理，并給出解決方法，供大家參考。

一個峰或幾個峰是負峰

解決方法：流動相吸收本底高；進樣過程中進入空氣；樣品組分的吸收低于流動相。

所有峰均為負峰

解決方法：信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒；光學裝置尚未達到平衡。

所有峰均為寬峰

解決方法：系統未達到平衡；溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多；色譜柱尺寸及類型選擇不正確；色譜柱或保護柱被污染或柱效降低；溫度變化造成的影響。

所出峰比預想的小

解決方法：樣品黏度過大；進樣品故障或進樣體積誤差；檢測器設置不正確．定量環體積不正確；檢測池污染；檢測器燈出現問題。

保留時間變化

可能的原因:解決方法

1.柱溫變化:柱恒溫

2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動相平衡柱

3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液

4.柱污染:每天沖洗柱

5.柱內條件變化:穩定進樣條件,調節流動相

6.柱快達到壽命:采用保護柱

保留時間縮短

可能的原因:解決方法

1.流速增加:檢查泵,重新設定流速

2.樣品超載:降低樣品量

3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向

4.流動相組成變化:防止流動相蒸發或沉淀

5.溫度增加:柱恒溫

保留時間延長

可能的原因:解決方法

1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡

2.硅膠柱上活性點變化:用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱

3.鍵合相流失:流動相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向

4.流動相組成變化:防止流動相蒸發或沉淀

5.溫度降低:柱恒溫

肩峰

可能的原因:解決方法

1.樣品體積過大:用流動相配樣,總的樣品體積小于峰的15%

2.樣品溶劑過強:采用較弱的樣品溶劑

3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

4.柱內燒結不銹鋼失效:更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品

5.進樣器損壞:更換進樣器轉子

鬼峰

可能的原因:解決方法

1.進樣閥殘余峰:每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗

2.樣品中未知物:處理樣品

3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)

4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑

5.水污染(反相):通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水

基線噪聲

可能的原因:解決方法

1.氣泡(尖銳峰):流動相脫氣,加柱后背壓

2.污染(隨機噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑

3.檢測器燈連續噪聲:更換氘燈

4.電干擾(偶然噪聲):采用穩壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)

5.檢測器中有氣泡:流動相脫氣,加柱后背壓

峰拖尾

可能的原因:解決方法

1.柱超載:降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相

2.峰干擾:清潔樣品，調整流動相，使用更長的色譜柱

3.硅羥基作用：加三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值，鈍化樣品

4.柱內燒結不銹鋼失效:更換燒結不銹鋼，加在線過濾器，過濾樣品

5.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件

6.死體積或柱外體積過大:連接點降至低，對所有連接點作合適調整，盡可能采用細內徑的連接管

7.柱效下降:用較低腐蝕條件，更換柱，采用保護柱，活化色譜柱

峰展寬

可能的原因:解決方法

1.進樣體積過大:用流動相配樣，總的樣品體積小于峰的15%

2.在進樣閥中造成峰擴展:進樣前后排出氣泡以降低擴散

3.數據系統采樣速率太慢:設定速率應是每峰大于10點

4.檢測器時間常數過大:設定時間常數為感興趣峰半寬的10%

5.流動相粘度過高:增加柱溫,采用低粘度流動相

6.檢測池體積過大:用小體積池,卸下熱交換器

7.保留時間過長:等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫

8.柱外體積過大:將連接管徑和連接管長度降至小

9.樣品過載:進小濃度小體積樣品

峰分叉

可能的原因：解決方法

1.保護柱或分析柱污染：取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2.樣品溶劑不溶于流動相：改變樣品溶劑，如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

基線漂移

可能的原因：解決方法

1、柱溫波動（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器）：控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器

2、流動相不均勻（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移）：使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。

3、流通池被污染或有氣體：用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）

4、檢測器出口阻塞（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線）：取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。

5、流動相配比不當或流速變化：更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

6、柱平衡慢：特別是流動相發生變化時，用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。

7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成：檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑。

8、樣品中有強保留的物質以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線：使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

9、使用循環溶劑，但檢測器未調整：重新設定基線。當檢測器動力學范圍發生變化時，使用新的流動相。

10、檢測器沒有設定在大吸收波長處：將波長調整至大吸收波長處。

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