南京科捷檢測(cè)科技發(fā)展有限公司作者
你在液相色譜使用過(guò)程中是不是會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題,別擔(dān)心,本文針對(duì)色譜圖的異常問(wèn)題進(jìn)行了整理,并給出解決方法,供大家參考。
一個(gè)峰或幾個(gè)峰是負(fù)峰
解決方法:流動(dòng)相吸收本底高;進(jìn)樣過(guò)程中進(jìn)入空氣;樣品組分的吸收低于流動(dòng)相。
所有峰均為負(fù)峰
解決方法:信號(hào)電纜接反或檢測(cè)器輸出極性設(shè)置顛倒;光學(xué)裝置尚未達(dá)到平衡。
所有峰均為寬峰
解決方法:系統(tǒng)未達(dá)到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動(dòng)相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護(hù)柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
所出峰比預(yù)想的小
解決方法:樣品黏度過(guò)大;進(jìn)樣品故障或進(jìn)樣體積誤差;檢測(cè)器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測(cè)池污染;檢測(cè)器燈出現(xiàn)問(wèn)題。
保留時(shí)間變化
可能的原因:解決方法
1.柱溫變化:柱恒溫
2.等度與梯度間未能充分平衡:至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱
3.緩沖液容量不夠:用>25mmol/L的緩沖液
4.柱污染:每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化:穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相
6.柱快達(dá)到壽命:采用保護(hù)柱
保留時(shí)間縮短
可能的原因:解決方法
1.流速增加:檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載:降低樣品量
3.鍵合相流失:流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化:防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加:柱恒溫
保留時(shí)間延長(zhǎng)
可能的原因:解決方法
1.流速下降:管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡
2.硅膠柱上活性點(diǎn)變化:用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱
3.鍵合相流失:流動(dòng)相PH值保持在3-7.5檢查柱的方向
4.流動(dòng)相組成變化:防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度降低:柱恒溫
肩峰
可能的原因:解決方法
1.樣品體積過(guò)大:用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于峰的15%
2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng):采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
5.進(jìn)樣器損壞:更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子
鬼峰
可能的原因:解決方法
1.進(jìn)樣閥殘余峰:每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物:處理樣品
3.柱未平衡:重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對(duì)色譜)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜):每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相):通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量,用HPLC級(jí)的水
基線噪聲
可能的原因:解決方法
1.氣泡(尖銳峰):流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機(jī)噪聲):清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑
3.檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲:更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲):采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)
5.檢測(cè)器中有氣泡:流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓
峰拖尾
可能的原因:解決方法
1.柱超載:降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾:清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相,使用更長(zhǎng)的色譜柱
3.硅羥基作用:加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品
4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效:更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品
5.柱塌陷或形成短路通道:更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
6.死體積或柱外體積過(guò)大:連接點(diǎn)降至低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管
7.柱效下降:用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱,活化色譜柱
峰展寬
可能的原因:解決方法
1.進(jìn)樣體積過(guò)大:用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于峰的15%
2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展:進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散
3.數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢:設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)
4.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過(guò)大:設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣峰半寬的10%
5.流動(dòng)相粘度過(guò)高:增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相
6.檢測(cè)池體積過(guò)大:用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng):等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過(guò)大:將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至小
9.樣品過(guò)載:進(jìn)小濃度小體積樣品
峰分叉
可能的原因:解決方法
1.保護(hù)柱或分析柱污染:取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞,拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在,可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染,運(yùn)用適當(dāng)?shù)脑偕胧H绻麊?wèn)題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。
2.樣品溶劑不溶于流動(dòng)相:改變樣品溶劑,如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。
基線漂移
可能的原因:解決方法
1、柱溫波動(dòng)(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器):控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器
2、流動(dòng)相不均勻(流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移):使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)
4、檢測(cè)器出口阻塞(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線):取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。
5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化:更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
6、柱平衡慢:特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí),用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。
7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成:檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線:使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑,但檢測(cè)器未調(diào)整:重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相。
10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在大吸收波長(zhǎng)處:將波長(zhǎng)調(diào)整至大吸收波長(zhǎng)處。
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