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基因組DNA提取常見問題及解決方案

2010年10月16日 09:32:58人氣:1277來源:上海銳谷生物科技有限公司

基因組DNA提取常見問題及解決方案
1 沒有或獲得的DNA量很少
A 確保DNA Wash Buffer中是否加入要求量的無水乙醇
B 樣品裂解不充分
建議:加大裂解緩沖液的量或減少樣品的量;將組織材料充分研磨或勻漿;需要蛋白酶K消化的樣品,增加蛋白酶K的用量,或者延長蛋白酶K的消化時間,并將組織盡可能的減碎。
C 吸附不充分
建議:上柱前,請確保裂解混合液中加入適量的無水乙醇。
D DNA洗脫不當
建議:洗脫液較少時,應加在膜的中間;采用ddH2O洗脫時,應保證pH值在7.0-8.5;樣品量較少時,若洗脫體積過大,會相應降低DNA的濃度
E 樣品中DNA含量少
如果樣品中本身DNA含量少,應加大初始材料的量,并相應的增加各種緩沖液的量。
2 柱子堵塞,或者膜上顏色殘留
A 樣品過多
建議:減少樣品的使用量,或者增加裂解緩沖液的量
B 樣品裂解不充分,使用了過多的樣品,或者樣品沒有研磨充分
建議:減少樣品的使用量,充分研磨樣品或者增加裂解液用量
C 裂解后,吸取上清時,帶入雜質
建議:離心后,小心吸取上清,避免吸起沉淀,如有沉淀吸起,再次離心后吸取上清。
3 OD260/OD280偏低
A 蛋白質殘留
建議:離心后,吸取上清時,應盡量避免吸起沉淀
B 用ddH2O洗脫DNA時,因為pH和離子濃度的影響,OD比值可能會偏低,但是并不代表純度低。
C OD260/OD280偏高
A 有RNA殘留
建議:檢查RNase A是否加入,或者RNase A活性下降。
5 不能順利用于后續酶反應實驗
A 乙醇殘留
建議:在洗脫前,將吸附柱開蓋再次離心,以*去除殘留的乙醇。

 

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