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原發性高血壓患者外周血白介素-6基因表達及意義

2010年10月12日 11:35:09人氣:3108來源:上海勁馬實驗設備有限公司

【摘要】    目的: 觀察原發性高血壓患者外周血白介素-6(IL-6)基因表達,初步探討其與原發性高血壓的關系及其意義。方法: 用放射免疫法測定62例原發性高血壓患者和30例正常對照者外周血IL-6蛋白含量,用逆轉錄聚合酶鏈反應法檢測外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達。結果: 與對照組比較,原發性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平及外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達均顯著增高(P<0.01)。結論: IL-6可能參與了原發性高血壓的病理生理過程,外周血單個核細胞的IL-6 mRNA表達上調可能是原發性高血壓患者外周血IL-6蛋白水平升高的機制之一。

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【關鍵詞】  白細胞介素6; 基因表達; 高血壓; 血液

  [Abstract] Objective: To observe the expression changs of interleukin-6 (IL-6) in peripherial blood of patients with essential hypertension (EH), and to probe the relationgship between IL-6 mRNA level and EH. Methods: The concentrations of circulating IL-6 of 62 EH patients (group EH) and 30 normal people (group CN) were measured by using radioimmunoassay, and the expression of mRNA of IL-6 in mononuclear cells was measured with reverse transcription polymerase chain reaction. Results: The concentration of protein IL-6 in peripherial blood and IL-6 mRNA in mononuclear cell of group EH were significantly higher than those of group CN (P<0.01). Conclusions: IL-6 might participate the patho-physiology process of EH.; Up-regulating expression of IL-6 mRNA may be one of the mechanisms increasing protein IL-6 in peripherial blood of EH patient.

  [Key words]  interleukin-6;gene expression; hypertension;blood

    原發性高血壓(essential hypertension,EH)是以體循環動脈壓升高為主要表現的臨床綜合征,嚴重危害人類健康,但其發病機制及某些病理過程仍未*闡明。近年來研究提示,炎癥介質在EH發生發展的不同階段發揮了重要作用,但目前針對炎癥介質基因表達方面的檢測與分析尚少見。2007年2月~12月檢測62例EH患者外周血白介素-6(interleukin-6,IL-6)蛋白水平及單個核細胞IL-6 mRNA的表達,探討外周血IL-6的變化與EH的關系。

  1  對象與方法

  1.1  對象及分組  

  按《中國高血壓防治指南(2005年修訂版)》制定的標準,選取心血管科住院和門診新診斷或未經正規降壓治療的EH患者62例,同時選取正常的健康體檢者30例作為對照組。排除繼發性高血壓、經冠狀動脈造影確診合并冠心病者、血栓出血性疾病、糖尿病、高脂血癥、感染、嚴重肝腎疾病、自身免疫性疾病及腫瘤性疾病、近期有手術或外傷史等影響IL-6水平的患者。

  1.2  方法

  1.2.1  主要試劑和儀器 

  人淋巴細胞分離液(上海捷瑞),Trizol試劑(美國Invitrogen),焦炭酸二乙酯(瑞興),逆轉錄試劑盒(Promega),PCR試劑盒(Promega),100 bp DNA Ladder Marker、D2000 DNA Marker,人IL-6放射免疫分析藥盒;ULT-1386-3三洋-80 ℃低溫冰箱(日本),5745臺式冷凍離心機(德國),Eppendorff centrifuge 5810R 高速離心機,Amersham核酸蛋白分析儀,PCR儀(PE geneAmp PCR System 2400)(Perkin Elmer),DNA成像分析儀(Gel Doc EQ)(Bio-Rad),酶標儀(ELx800)(Bio-Tek公司)。引物設計由上海生物工程公司合成:IL-6上游引物5' -GAGGAGACTTGCCTGGTGAA -3',下游引物5' -ATCTGAGGTGCCCATGCTAC -3';β-action上游引物5'-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT -3',下游引物5'-GGGCACGAAGGCTCATCATT -3'。

  1.2.2  標本采集 

  受檢者空腹12 h,次日清晨采集肘正中靜脈血8 ml,其中4 ml置普通生化管中,室溫靜置2 h,自然凝固后,1 000 r/min,離心10 min,收集上清液置于-80 ℃冰箱保存待測;另4 ml置于EDTA抗凝試管中搖勻后即刻置4 ℃冰箱冷存,6 h內提取RNA。

1.2.3  外周血IL-6蛋白含量測定 

  用保存待測的血清,嚴格依照IL-6放射免疫分析藥盒說明書的步驟操作。

  1.2.4  人血單個核細胞中RNA提取和逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR) 
  淋巴細胞分離液提取外周血中單個核細胞后,按照說明書的步驟提取總RNA,再按逆轉錄試劑盒說明書步驟合成cDNA,并用PCR技術擴增目的片段。PCR產物用1.5% 瓊脂糖凝膠電泳,溴乙錠顯色。測定各條帶灰度值,以β-actin為內參,用IL-6與β-actin的灰度比值定量IL-6。

  1.3  統計學處理采用SPSS11.5統計軟件進行數據分析處理,數據以(x±s)表示,組間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。貴陽醫學院學報  33卷    6期張玲玲等  原發性高血壓患者外周血白介素-6基因表達及意義2  結果  EH組和正常對照組間的年齡、性別、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇、空腹血糖和外周血白細胞比較,無統計學差異(見表1)。 EH患者外周血IL-6水平及單個核細胞IL-6 mRNA表達的變化見表2,與對照組比較,EH組外周血IL-6蛋白水平及單個核細胞IL-6 mRNA表達均顯著增高(P<0.01)。表1  EH組及對照組的基本資料(略)表2  EH患者及對照組外周血IL-6水平(略)注:與對照組比較,(1)P<0.01。

  3  討論  

  原發性高血壓的發病機制及某些病理過程至今尚未*闡明,有學者研究發現高血壓與炎癥有關,提示炎癥可能在高血壓的發病機制中起重要作用[1]。IL-6是一種參與免疫和炎癥反應的多功能促炎細胞因子,體內單核細胞或巨噬細胞、內皮細胞等均可分泌IL-6。IL-6作為重要的炎性細胞因子之一,在心血管系統中的作用越來越受到重視。本研究顯示,原發性高血壓組患者外周血IL-6蛋白水平明顯高于對照組,提示IL-6可能參與了原發性高血壓的病理生理過程。因此,積極探索控制炎癥的方法可能是原發性高血壓病治療的前景策略之一。  

  原發性高血壓患者外周血IL-6升高的機制尚不十分明了。近年來雖已有研究發現原發性高血壓患者外周血AngⅡ、IL-6、內皮素-1等細胞因子水平增高,并認為細胞因子可能與原發性高血壓的發生發展相關[2~6],但針對原發性高血壓患者在外周血單個核細胞中的IL-6 mRNA表達水平方面的檢測與分析少見報道。本研究顯示,與對照組比較,原發性高血壓組外周血單個核細胞中IL-6 mRNA表達顯著增高,提示外周血單個核細胞的IL-6 mRNA表達上調可能是導致原發性高血壓患者外周血IL-6蛋白含量升高的一個因素。IL-6可能通過以下機制影響原發性高血壓的發生發展:(1)升高血管平滑肌細胞內Ca2+濃度,引起血管收縮;(2)使白細胞流變學特性發生改變,易黏附于血管內皮細胞,增加血管阻力;(3)從多種途徑促進血管平滑肌細胞增生、增殖,導致血管重構;(4)損傷血管內皮;(5)IL-6還可能與多種高血壓危險因素協同促進高血壓的發生和發展[7]。

參考文獻
    [1]Sesso HD,Buring JE,Rifai N, et al.C-reactive protein and the risk of developing hypertension[J]. JAMA,2003(290):2945-2951.

  [2]Chae CU,Lee RT,Rifai N,et al. Blood pressure and inflammation in apparently healthy men[J]. Hypertension,2001(38):399-403.

  [3]Parissisj T,Korovesis S,Giazitzogloue E,et al .Plasma profiles of peripheral monocyte related inflammatory markers in patients with arterial hypertension : correlations withplasma endothelin-1[J].Int J Cardiol , 2002(1) :13221.

  [4]Luft FC. Angiotensin, inflammation, hypertension, and cardiovascular disease[J]. Curr Hypertens Rep,2001(3):61-67.

  [5]Oshchepkova EV,Dmitriev VA,Titiov VN,et al.The activity of nonspecific inflammation in hypertensive patients[J].Ter Arkh,2007(2):157-158.

  [6]王艷軍,何冰,李曉東.TNF-α、IL-6、NO在高血壓胰島素抵抗患者血漿中的變化及意義[J]. 中國醫科大學學報,2006(5):525-526,529.

  [7]Hirano T.Interleukin 6 and its receptor. ten years later[J]. Int Rev Immunol, 1998(324):249-284.

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