上海通蔚生物科技有限公司作者
透析袋預(yù)處理方法
(1)將透析管剪成適當(dāng)長度,10-20cm的小段,即形成透析袋
(2)在大體積2%(m/V)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH*8.0)中將透析袋煮沸10min
(3)將透析袋用蒸餾水*漂洗
(4)將透析袋置1mmol/L EDTA(PH*8.0)中煮沸10min
(5)將透析袋冷卻,存放于4攝氏度,應(yīng)確保透析袋始終浸沒在液體中。
重要:從此步起用透析袋時一定要帶手套操作
(6)在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。
用過的透析袋保存前需要怎么處理?
用生理鹽水浸泡以去掉蛋白,并用蒸餾水清洗干凈,然后置50%乙醇中保存即可;用完以后,要*洗干凈,透析袋也可以保存在0.1%疊氮鈉(可防止微生物生長)里;0.05%-0.1%疊氮鈉,或者1mM EDTA,或者50%甘油中4度保存,公司的人建議前兩種保存比較好!
透析和透析袋的處理
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析 袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為"保留液",袋(膜)外的溶液稱為"滲出液"或"透析液"。透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析 的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動物膜和玻璃紙等,但用的zui多的還是用纖維素制成的透析膜, 目前常用的是美國Union Carbide (聯(lián)合碳化物公司)和美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種尺寸的透析管,截留分子量MwCO(即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的zui小分子量,縮寫為MwCO)通常為1 萬左右。商品透析袋制成管狀,其扁平寬度為23 mm~50 mm不等。為防干裂,出廠時都用10%的甘油處理過,并含有極微量的硫化物(0.1%)、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。
透析袋的處理:可先用50%乙醇煮沸1小時,再依次用50%乙醇、0.01 mol/L碳酸氫鈉和0.001 mol/L EDTA溶液洗滌,zui后用蒸餾水沖洗即可使用。實驗證明,50%乙醇處理對除去具有紫外吸收的雜質(zhì)特別有效。(也可先在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘,用蒸餾水*清洗后,再放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘。)使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中,確保透析袋始終浸沒在溶液內(nèi)。若長時間不用,可加少量NaN2,以防長菌。從此 時起取用透析袋必須戴手套。洗凈涼干的透析袋彎折時易裂口,用時必須仔細檢查,不漏時方可重復(fù)使用。
新透析袋 如不作如上的特殊處理,則可用沸水煮五至十分鐘,再用蒸餾水洗凈,即可使用。使用時,一端用橡皮筋或線繩扎緊,也可以使用特制的透析袋夾夾緊,由另一端灌滿水,用手指稍加壓,檢查不漏,方可裝入待透析液,通常要留三分之一至一半的空間,以防透析過程中,透析的小分子量較大時,袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi) 將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時,體積增加50%是正常的。為了加快透析速度,除多次更換透析液外,還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些, 可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析,可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管,以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是:用1% BaCl2檢查(NH4)2SO4,用1% AgNO3 檢查NaCl、KCl等
透析膜 (前處理方法如下):
1. 戴手套把透析膜剪成適當(dāng)長度,浸在蒸餾水中 15 min 泡軟。
2. 浸入 10 mM sodium bicarbonate 中,并加熱至 80℃,一邊攪拌至少 30 min。
3. 換到 10 mM Na2·EDTA 中浸泡 30 min,以新鮮的 EDTA 同樣方法處理三次。
4. 再用 80℃ 蒸餾水洗 30 min,然后換到 20% 酒精中,放在 4℃ 冰箱中保存。
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