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傳代細胞培養操作步驟

2010年09月04日 15:45:51人氣:6221來源:上海瑞齊生物科技有限公司

1)吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。
2)向瓶內加入*液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。
3)置37℃孵箱或室溫(25℃溫度)下進行消化,2~5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察,當發現胞質回縮、細胞間隙增大后,應立即中止消化。
4)吸出消化液,向瓶內加入Hanks液少量,輕輕轉動培養瓶,把殘留消化液沖掉,然后再加培養液。如果僅使用*消化,在吸除胰蛋白液后,可直接加入少量含血清的培養液,終止消化。
5)使用彎頭吸管,吸取瓶內培養液,按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞,使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔,以防用力過猛損傷細胞。
6)用計數板計數后,分別接種于新的培養瓶中,置CO2培養箱中進行培養。
7)細胞培養換液時間應根據細胞生長的狀態和實驗要求來確定。一般2~3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面,即可使用;也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。
2. 注意事項
1)掌握好細胞消化的時間,消化時間過短時,細胞不宜從瓶壁脫落,過長的消化會導致細胞脫落、損傷。
2)掌握好消化濃度,當消化液濃度過高時,消化時間應縮短,過低時細胞消化時間相對延長。
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