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人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)酶聯(lián)免疫(ELISA)

2010年07月09日 09:32:22人氣:987來源:上海源葉生物科技有限公司

藥品名稱:
通用名:人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒定性測定人血液、或其它相關組織中EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)
實驗原理:
本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)。用純化的人EB病毒核心抗原IgG抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)相結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的EB病毒核心抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)的存在與否。
試劑盒組成:
1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1/瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1瓶 12 密封袋 1個
標本要求:
1.標本處理:血清、血漿標本可直接檢測
2.標本按要求制備后盡早進行實驗。如不能及時檢測,可將標本在-20℃保存一個月,但應避免反復凍融。
3.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照(標準品)50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

結果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人EB病毒核心抗原IgG抗體 (EBNA-1)陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

 

關鍵詞:酶標儀
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