上海酶聯生物研究所作者
有關血清使用中的常見問題
1.保存血清的辦法?
我們建議血清應保存在-5℃至-20℃。若你一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。
2.如何解凍血清才不會使產品質量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱中取出后,先置于2-8℃冰箱中使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規則地搖晃均勻。
3.血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?
血清中沉淀物的出現有許多原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的;而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管中,以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。
4.何謂熱滅活?有必要做熱滅活嗎?
一般以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活性,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經過處理的血清對細胞生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。
而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者認為是微生物的分裂擴增。
因此建議若非必須,可以不需要做熱滅活這一步。如此以來更確保血清的質量。
5.如何避免沉淀物的出現?
建議在使用血清的時候,注意正確的血清解凍步驟,并盡量避免滅活血清及長時間的將血清置于高溫環境中。
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