上海銳谷生物科技有限公司作者
血細胞檢驗是指對血液中白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)及相關數據的計數檢測分析,也稱血常規檢驗。血常規檢驗不僅是診斷各種血液病的主要依據,而且對其它系統疾病的診斷和鑒別也可提供許多重要信息,是臨床醫學檢驗中zui常用、zui重要的基本內容之一。血常規檢驗的zui原始的手段是通過顯微鏡人工鏡檢,隨著基礎醫學的發展,高科學技術的應用,*已成為取代鏡檢進行血常規分析的重要手段,尤其是帶分類的*。
無論是鏡檢、還是使用*,要獲得血常規檢驗的穩定可靠、準確的數據,防止臨床診療人出錯誤的判斷,實驗室檢驗要充分考慮影響血常規檢驗中的多種影響因素,并嚴格加以控制:
一、標本的采集
為了取得準確、可靠的檢驗結果,必須取得高質量的標本。高質量的標本是高質量檢驗的*步。保證血液標本中各項細胞的完整形態是作為血常規檢驗用的高質量的標本的zui基本的要求。血液細胞檢驗標本的制備分為采集和抗凝2個步驟。
1.標本的采集
按采血部位的不同,取得血常規檢驗標本,zui常用的途徑是靜脈采血和末梢毛細血管采血。各類文獻均表明,靜脈血血樣是zui可靠的標本,手指血是末梢毛細血管血樣中與靜脈血差異zui小且較為穩定的血樣。有研究表明,與靜脈血相比,手指血的準確性和可重復性仍然較差:白細胞計數明顯高(+8%)而血小板計數明顯低(-9%)。因此,絕大多數專家建議:血常規檢驗特別是應用*時,應使用靜脈血。
2.標本的抗凝
用于血常規檢驗的血樣必須經抗凝劑抗凝處理,在目前的眾多抗凝劑中,EDTA鹽(EDTA-Na2,EDTA-K2,EDTA-K3)是對白細胞形態和血小板影響相對較小的抗凝劑,用于血常規檢驗。除采血因素的影響(生理性因素、采血部位等)外,多數情況下,血樣的質量取決于血液和抗凝劑的比例。血液比例過高時,由于抗凝劑相對不足,血漿中出現微凝血塊的可能性增加,在用于*時,微凝血塊可能阻塞儀器,同時影響一些檢驗指標。血液比例過低,抗凝劑相對過剩,對檢驗指標會造成嚴重影響。血液經EDTA抗凝后,白細胞的形態會發生改變,這種改變和時間及EDTA濃度有關。EDTA的*濃度(與血液比)為1.5mg/ml,如果血樣少,EDTA的濃度達到2.5mg/ml,中性粒細胞腫脹、分葉消失,血小板腫脹、崩解、產生正常血小板大小的碎片,這些改變都會使血常規檢驗和血細胞計數得出錯誤結果。這一點在用自動*時尤為重要。
靜脈血和末梢血均可經抗凝劑抗凝成全血標本(標本中不含稀釋液,或對標本造成的稀釋的影響極小),顯而易見,末梢血抗凝標本要達到合適的血液和抗凝劑的比例是非常困難的。因此,多數專家建議,在制備全血比例是非常困難的。因此,多數專家建議,在制備全血標本時,應使用定量的含EDTA鹽的真空*采集靜脈血。
無論鏡檢,或是使用*,由于絕大多數的對標本稀釋的稀釋液中含有抗凝劑,在一定量的稀釋液中可直接加入微量靜脈血或末梢血液(10-40μl)即可制備成通常所說的預稀釋標本。多數情況下,預稀釋標本的制備適用于末梢血的血樣。
二、標本的稀釋
血液是由血細胞和血漿兩部分組成的紅色粘稠混懸液。在進行血細胞檢驗計數時,直接用血液計數是困難的,無論是鏡檢還是用*,血液均需合適準確的稀釋后才能進行血細胞的檢驗計數。基于*的基本原理,在*的設計應用中,稀釋倍數和計數容量是zui重要的設計指標之一。
自50年代初,美國庫爾特研制了電阻法(小孔原理)*以來,血細胞的稀釋液為介質的流動的形式通過傳感器測量計數(如圖-1),血細胞通過傳感器時一定需要排隊通過,否則可能就會造成重合損失(如圖-2)。
實際應用時,是將血液稀釋于稀釋液中形成稀釋標本(稀釋比為1:N),以流動檢測的方式測出一定量(V)的稀釋標本內的血細胞數(T),經換算后得出血液中的細胞濃度(L):L-T×N/V.
由此可見,準確合理的稀釋倍數(在用于儀器時,RBC、PLT的稀釋倍數一般為1:10000至1:3000;WBC、HGB的稀釋倍數一般為1:250左右)和準確、穩定的測量容量是血細胞檢測的又一重要基礎。稀釋倍數過低,會形成細胞排隊通過傳感器的重合缺損;稀釋倍數過大,則會造成一定測量容量內血細胞的數量過少,這都會嚴重影響血液細胞檢驗的測量精度。
三、標本的儲存
如前文所述,抗凝劑因時間和濃度的不同,會造成對血細胞形態的影響。有研究表明,用EDTA抗凝靜脈血標本,在標本收集后的5分鐘內或30分鐘后,8小時內(室溫)檢測,可以得到*的檢測結果。如果不需要血小板和白細胞分類的準確數據,則標本可以在2℃-8℃的條件下存入至24小時。
預稀釋標本一般需要在標本制備后10分鐘內予以測量;如果稀釋液中添加細胞穩定劑,預稀釋標本的存放時間也不可超過4小時。
總之,影響血常規檢驗結果的因素很多,要想取得準確的檢驗數據,就要在實驗的每一個步驟中都嚴格按照操作規程進行。本文所講述的內容,僅僅是對血常規檢驗中注意事項的部分總結,可能存在的不足和缺陷,還是請常年處于臨檢一線工作中的老師們批評、指正。
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