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揭開低豐度蛋白的秘密

2010年05月31日 17:06:52人氣:937來源:上海酶聯生物研究所

揭開低豐度蛋白的秘密

摘要: 生物樣品中高豐度蛋白的存在,掩蓋了更具研究意義的低豐度蛋白。比如,血清或血漿中的白蛋白或免疫球蛋白讓其它蛋白的檢測變得挑戰性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服這種挑戰,幫你揭開低豐度蛋白的秘密。 


生物樣品中高豐度蛋白的存在,掩蓋了更具研究意義的低豐度蛋白。比如,血清或血漿中的白蛋白或免疫球蛋白讓其它蛋白的檢測變得挑戰性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服這種挑戰,幫你揭開低豐度蛋白的秘密。ProteoMiner 低豐度蛋白富集系統是一種新型的樣品制備手段,它能極為有效地減少復雜生物樣品中蛋白濃度的動態范圍。


ProteoMiner技術是如何富集低豐度蛋白的呢?下面這張圖可以形象地說明。它是基于復雜樣品與高度多樣的六肽配基之間的相互作用。每個ProteoMiner珠子上都有不同的六肽配基,它們與某種蛋白具有特定的親和性。當一個復雜的蛋白質樣品與大量六肽配基共同孵育時,樣品中的蛋白質會相應地找到其結合位點而被珠子捕獲。由于珠子的結合能力有限,高豐度蛋白迅速飽和了相應配基(紅色和黃色珠子),而多余的蛋白就被洗掉。與此相反,低豐度蛋白通過與特定配基(粉色和綠色珠子)的結合而富集。通過這種方式,低豐度蛋白質相對得到了富集與濃縮。

 
ProteoMiner系統采用了組合的六肽文庫方法,而不是傳統的免疫去除方法,這就zui大限度地減少了對已知抗體的依賴,并防止某些與高豐度蛋白相結合的低豐度蛋白質的去除。某些低豐度蛋白無法通過傳統方法檢測,也能借此有效富集和濃縮。ProteoMiner系統適合處理多種類型的樣品,比如血清、血漿、尿液、膽汁和血小板,與各種主流的下游蛋白分析技術兼容,包括1-D或2-D凝膠電泳,層析,SELDI及質譜。


根據起始樣品蛋白量的不同,ProteoMiner 低豐度蛋白富集系統分別提供了小容量和大容量兩種試劑盒。小容量試劑盒適合處理有限的樣本材料,建議至少10 mg蛋白;大容量試劑盒則適合處理50 mg以上的蛋白。ProteoMiner系統采用離心柱形式,操作方便,且一次性的離心柱避免樣品的殘留污染。試劑盒中包含了富集低豐度蛋白過程中所需的所有必要試劑。小容量和大容量試劑盒分別可處理2個或10個樣本。

利用ProteoMiner protein enrichment kit富集低豐度血清蛋白。取等量的總蛋白進行2-D電泳,從圖中可以看出,ProteoMiner珠子處理后凝膠的分辨率大大改善。高豐度蛋白大大減少,右圖中可看見更多的蛋白點。100 μg蛋白樣品在11 cm ReadyStrip pH 5–8 IPG膠條上等電聚焦,然后在Criterion 8–16% Tris-HCI預制膠中進行第二向的電泳。

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