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人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA試劑盒使用說明書

2010年05月18日 18:46:27人氣:518來源:廈門慧嘉生物科技有限公司

 

人抗百日咳病毒(PT-Ab)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:人抗百日咳病毒(PT-Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于定性測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中抗百日咳病毒(PT-Ab)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中人抗百日咳病毒(PT-Ab)。用純化的百日咳病毒(PT)抗原包被微孔板,制成固相抗原,與樣品中抗百日咳病毒(PT-Ab)溫育后,加入*標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人抗百日咳病毒(PT-Ab)的存在與否。
試劑盒組成

1
20倍濃縮洗滌液
50ml×1瓶
8
樣品稀釋液
6ml×1瓶
2
鏈霉親和素-HRP
6ml×1瓶
9
陰性對(duì)照
0.5ml×1瓶
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
10
陽性對(duì)照
0.5ml×1瓶
4
*標(biāo)記的抗-IgG抗體
6ml×1瓶
11
密封袋
1個(gè)
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
12
封板膜
3張
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
13
說明書
1份
7
終止液
6ml×1瓶
 
 
 

 
標(biāo)本要求
1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1.         編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔
2.         加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育45分鐘。
3.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
5.         加*標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入*標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6.         洗滌:操作同4。
7.         加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8.         洗滌:操作同4。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
 
結(jié)果判定:
  試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人抗百日咳病毒(PT-Ab)陰性
 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人抗百日咳病毒(PT-Ab)陽性
 
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測(cè)時(shí),參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8
2.有效期:6個(gè)月
 
廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、一抗二抗、細(xì)胞因子、生物試劑、移液器、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
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關(guān)鍵詞:酶標(biāo)儀 移液器
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