/Productlist.aspx?ClassId=25【摘要】 　　目的為控制樂山梔子的質量，建立液相色譜法測定樂山梔子中熊果酸含量的方法。方法采用液相色譜法，以熊果酸為化學對照品，固定相：UltimateTM C18鍵合硅膠柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），流動相：甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06），流速0.6 ml·min-1，溫度25℃，波長210 nm測定樂山梔子熊果酸含量。結果熊果酸在0.1～3.0 μg范圍內峰面積A與其質量M呈現良好的線性關系，其回歸方程為： A＝－12 954.882 9＋452 850.960 3 M，r＝0.999 6，n＝7；3批樂山梔子中熊果酸的含量分別為（0.255 5±0.001 6）mg·g-1藥材，RSD＝0.622 1%，n＝4；（0.265 825±0.003 491）mg·g-1藥材，RSD＝1.313%，n＝4；（0.258 875±0.006 198）mg·g-1藥材，RSD＝2.394%，n＝4；精密度實驗RSD＝1.754%，儀器精密度良好；穩定性實驗RSD＝3.493%,在3.5 h測定熊果酸的含量是穩定的；重現性實驗RSD＝0.905 1%，平均回收率101.9%。結論液相色譜法適合樂山梔子中熊果酸的含量測定，該方法操作簡便，結果穩定，精密度、重現性、回收率較好，值得推廣。
　　【關鍵詞】  樂山梔子；熊果酸；含量測定；液相色譜　

　Abstract：ObjectiveTo establish the method of determining thecotent of ursolic acid in Fructus Gardeniae by HPLC. MethodsHPLC was used to determine the content of Ursolic acid inFructus Gardenice ursolic acid as the standard, Solid phase:UltimateTM C18 （4.6 mm×250 mm，5   μm）, Liquidphase∶Methyiaicohol∶Water∶Acetic acid∶Triethylaminum（90∶10∶0.03∶0.06）, Flowrate：0.6ml·min-1，temperature：25℃,wavelength：210 nm.ResultsThecalibration curve was linear in the range of 0.1～3.0μg, and thereturn formula was A＝－12954.882 9＋452 850.960 3 M, r=0.9996,n＝7,  the contents of ursolic acid in Frctus Cardeniae were（0.255 5±0.0016）mg·g-1，RSD＝0.622 1%，n＝4；（0.265 825±0.003 491）mg·g-1，RSD＝1.313%，n＝4；（0.258 875±0.006 198）mg·g-1，RSD＝2.394%，n＝4,respectively. Precision RSD＝1.754%,stablityRSD%＝3.493，repeatability RSD＝0.9051%，recovery rate was101.9%.ConclusionHPLC is suitable for the determination of ursolicacid in Fructus Gardeniae from Leshan city. This method is simple,the result is stable and has good repeatability,recovery andprecision. It can be widely used for the quality control of FructusGardeniae.

　　Key words：Fructus Gardeniae from Leshan city；  Ursolicacid;  Content determination；  HPLC

　　梔子為茜草科植物梔子Gardenia jasminoidesEllis的干燥成熟果實，主產于浙江、四川、江西、重慶、湖北等省。梔子具有瀉火除煩、清熱、涼血解毒之功效，用于熱病心煩、黃疸、尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡癰等證。根據現代藥理研究證實，熊果酸為梔子重要有效成分，具有顯著而迅速降低谷丙轉氨酶，消退黃疸，增進食欲和恢復肝功能的作用，這在*注射液、茵陳蒿湯等方劑中得到廣泛的應用。梔子治療急性黃疸型肝炎、病毒性肝炎主要是通過其有效成分熊果酸實現的,熊果酸是梔子利膽退黃、抗病毒性肝炎的主要有效成分。梔子熊果酸還具有解熱降溫、抗炎、抗腫瘤等活性。有報道表明，梔子苷的生理活性有限，其利膽作用、保護肝損傷、降低轉氨酶方面均不及梔子中熊果酸明顯，而且梔子苷分子中雙鍵性質活潑，不穩定，易發生反應。相比而言，梔子熊果酸受熱更穩定，因此控制梔子熊果酸含量具有非常重要的質量評價意義［1～6］。本研究通過液相色譜法測定樂山梔子熊果酸含量，為建立樂山梔子質量新標準提供參考。

　　1 儀器與材料

　　SSI液相色譜儀；UltimateTM C18鍵合硅膠液相色譜柱（4.6 mm×250mm,5 μm）；AS3120A Ultrasonic Cleaner；AP-01P真空泵；HaierBCD-176DA電冰箱；SHH V21型長風三用電熱恒溫水浴箱；ZK072型電熱真空干燥箱；RE-52B型旋轉蒸發器；AS701KDT Ultrasonic Cleaner；UV-9200型紫外可見光分光光度計；FA1104W電子天平；Sh10A型水份快速測定儀；50目分樣篩； Kodak Easy share Z7590數位相機；CASIOfx-4800p電子計算器；冰醋酸、甲醇、三乙胺為分析純，色譜純甲醇；熊果酸化學對照品（110742-200516,約20mg,供含量測定用）（中國藥品生物制品檢定所）、梔子產自四川樂山（經課題組鑒定為茜草科植物梔子Gardeniajasminoides Ellis的干燥成熟果實）。

　　2 方法與結果

　　2.1 色譜條件固定相：UltimateTM C18鍵合硅膠柱（4.6 mm×250 mm,5μm）；流動相為甲醇∶水∶冰醋酸∶三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06）；流速0.6 ml·min-1；溫度25℃；波長210nm［7］。

　　2.2梔子熊果酸提取條件優選以藥材粒徑、甲醇加入量、超聲提取時間、超聲提取次數4因素3水平，以熊果酸收率為指標，選用L9（34）正交表優選梔子熊果酸提取條件為：梔子藥材粉碎為50目粉末，加入甲醇量為藥材量的5倍，每次超聲提取60min，超聲提取3次，可使熊果酸收得率達到zui大，且經濟合理，將另文報道。

　　2.3 熊果酸標準曲線繪制［8］精密稱取熊果酸化學對照品2.0 mg（60℃減壓干燥24 h），用無水甲醇定容于10ml容量瓶中，即得0.2 mg·ml-1的熊果酸對照品溶液。熊果酸在0.1～3.0μg范圍內峰面積A與其質量M呈現良好的線性關系，其回歸方程為：A＝－12 954.882 9＋452 850.960 3 M，r＝0.999 6，n＝7。

　　2.4  精密度實驗精密吸取上述熊果酸對照品溶液10μl，其積分面積RSD＝1.754%，n＝5，表明該方法、該儀器測定熊果酸精密度符合要求。

　　2.5  穩定性實驗精密吸取上述熊果酸對照品溶液10 μl，每隔30min測定1次，其積分面積RSD＝3.493%，n＝5。表明熊果酸用該方法在該儀器上3.5 h內測定結果較穩定，符合要求。

　　2.6  梔子熊果酸含量測定重現性實驗照前面“2.2”項梔子熊果酸的提取工藝，測得梔子熊果酸含量RSD＝0.9051%，表明該方法重現性實驗符合要求。

　　2.7  梔子熊果酸加樣回收率實驗照前面“2.2”項梔子熊果酸的提取工藝提取，取該溶液2ml，加入上述熊果酸對照品溶液0.3 ml，平均加樣回收率為101.9%，表明該方法測定梔子熊果酸的加樣回收率符合要求。

　　2.8 3批樂山梔子熊果酸含量測定按照“2.2”項的提取條件提取3批樂山梔子熊果酸，按照上述測定條件分別測定熊果酸含量，測定結果見表1［9］。

　　3 討論

　　經過采集樂山、云南、貴州、湖南、河南等地的梔子并測定熊果酸含量，發現樂山梔子含量zui高，證實其確為質量優良的正宗川梔子。

　　實驗發現，上述熊果酸對照品溶液積分面積為1.5×105～2.5×105，峰高為6×103～7×103，理論塔板數約1.2×104時，峰高法計算結果與真實值的誤差為1.240%，積分面積計算結果與真實值的誤差為1.415%，表明峰高法比積分面積法更接近真實值，尤其適用于熊果酸峰與*及其衍生物峰未*分開時。考慮到樂山梔子中熊果酸峰與*及其衍生物峰*分開，而且峰高法計算結果與峰面積法計算結果無顯著性差異，出于習慣考慮，本文仍采用峰面積法測定樂山梔子熊果酸的含量。表1 樂山梔子熊果酸含量（略）

　　冰醋酸主要用于改善熊果酸與*及其衍生物圖譜分離度，由于冰醋酸具有揮發性，對熊果酸與*及其衍生物圖譜分離度存在一定程度的波動，通過反復實驗，才得到較成功的圖譜。若改用不具有揮發性的磷酸，則能改善熊果酸與*及其衍生物圖譜分離度的波動性，可能更容易成功，有待于進一步研究。

　　熊果酸提取溫度在60℃以下，樣品溶液置于0℃冰箱中貯存，測定時分析室的溫度控制在25℃左右，以避免熊果酸分解對結果造成影響。

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