當前位置:南京生物試劑網>>技術文章>>細胞培養(yǎng)基的成分有哪些?
合成培養(yǎng)基的主要成分有:氨基酸、碳水化合物、無機鹽、維生素及其它輔助物質。
氨基酸
氨基酸是組成蛋白質的基本單位。不同種類的細胞對氨基酸的要求各異,但有幾種氨基酸細胞自身不能合成,必須依靠培養(yǎng)液提供,這幾種氨 基酸稱為必需氨基酸。其中*是細胞合成核酸和蛋白質必需的氨基酸,在缺少*時,細胞生長不良而死亡。因此,各種培養(yǎng)液中都有 較大量的*。但是,由于*在溶液中很不穩(wěn)定,應置于-20℃冰箱中保存,在使用前加入培養(yǎng)液內。已含*的培養(yǎng)液在 4℃冰 箱中儲存 2 周以上時,還應重新加入原來量的*。
碳水化合物
碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。
無機鹽
培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節(jié)細胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個 非常重要的因素, 細胞通??赡褪?260 mOsm/kg~320 mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意:向培養(yǎng)液中加入其它物質 有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養(yǎng)液中添加 HEPES 時需按以下方法調節(jié)鈉離子濃度。
緩沖系統(tǒng)
大多數細胞所需pH在 7.2-7.4。但是,細胞培養(yǎng)zui適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH (7.4-7.7),而傳代轉化細胞 系則需要偏酸pH(7.0-7.4)。由于多數培養(yǎng)液靠*(NaHCO3)與CO2體系進行緩沖,因此,氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中*濃度相 平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在 5%,培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為 1.97 g/L;如果CO2濃度維持在 10%,培養(yǎng)液中NaHCO3的 加入量為 3.95 g/L。細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。
HEPES 是一種非離子緩沖液,在 pH 7.2-7.4 范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES 緩沖液 可與低水平的碳酸鈉(0.34 g/L)共用,以抵消因額外加入 HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下,細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊,以防止培 養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養(yǎng)液中含有酚紅作為 pH 指示劑,酸性培養(yǎng)液呈橙黃色,堿性培養(yǎng)液呈深紅色。
維生素
在細胞培養(yǎng)中,盡管血清是維生素重要來源, 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。
其它成分
在一些較為復雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術中常用的DMEM培養(yǎng)液,使用時還需要補加丙酮酸鈉(2-Mercaptoethanol,2-Me)。2-Me對細胞生長有很重要的作用。有人認為它相當于胎牛血清,有直接刺激細胞增殖作用。2-Me的活性部分 是硫氫基,其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成*,能誘導細胞的增殖,為非特異性的激活作用。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細 胞的損害。另一個重要作用是促進分裂原的反應和DNA合成,增加植物凝集素(PHA)對淋巴細胞的轉化作用,已廣泛應用于雜交瘤技術,另外,也 開始用于一些難以培養(yǎng)的細胞。2-Me是一種小分子還原劑,極易氧化。分子量為 78.13,純的 2-Me是一種無色有刺激味的液體,比重為1.110-1.120(Do20),常用終濃度為 5×10-5M。常配制成 0.1M的儲存液,用時每升培養(yǎng)液加 0.5ml。
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